阿鲁 · 秦奈炎博士(Dr.Arul Chinnaiyan)是密歇根大学转录病理中心的负责人.此时,他正盯着一名癌症患者的基因序列打印结果发呆.这名患者是他的一个研究对象.研究结果显示:这名男性患者的癌症基因上还附带有艾滋病病毒的基因,这真是出人意料的发现.
本文就近年有关反式调控HBV肝细胞内靶向转录的物质基础及其作用机制进行综述.
近年来对于巨细胞病毒(CMV)的即刻早期(IE)基因和晚期(L)基因的结构和功能有了较为深入的研究.应用核酸杂交技术和聚合酶链反应等先进技术检测IE-mRNA和L-mRNA能在早期特异性地诊断CMV活动性感染,对于临床治疗和预后监测有重要的指导意义.
对丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的研究表明,NS5A在HCV转录、复制及细胞信号转导中有重要作用.NS5A影响干扰素(IFN)治疗丙型肝炎的疗效,但日本和欧洲对这方面的研究结果间存在差异,现就这方面的进展作一综述.
流感病毒NP蛋白在流感病毒感染中起到重要的作用,NP是vRNP(ribonucleoprotein,RNP,核糖核蛋白颗粒)的骨架结构,参与RNA的转录.它在细胞浆中合成,被转运到细胞核中组装成vRNP,然后被转运出细胞核进入细胞浆进行病毒颗粒的组装.本文就NP蛋白的核转运机制作一综述.
(接上期)2.3几种营养素对基因表达的调控2.3.1碳水化合物对基因表达的调控碳水化合物对许多基因的表达有调控作用,主要表现在碳水化合物在胃肠道被消化成葡萄糖并吸收入血以后,葡萄糖能够刺激脂肪组织、肝脏和胰岛β细胞中脂肪合成酶系和糖酵解酶基因的转录.下面以葡萄糖对肝细胞中L-丙酮酸激酶(L-pyruvate kinase,L-PK)基因和S14基因的表达调控为例,介绍碳水化合物对基因表达的调控机制及意义.
目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与宫颈癌发病的关系.方法:采用巢式逆转录聚合酶链反应(nested RT-PCR)及DNA 直接测序法对15例正常宫颈组织、30例宫颈癌组织及配对癌旁正常组织、宫颈癌Hela细胞系进行FHIT基因异常转录分析,并选择1例正常转录本及2例异常转录本进行DNA 序列分析.结果除7例宫颈癌组织及1例癌旁正常组织外,其余标本均扩增出FHIT基因野生型转录本.Hela细胞系同时存在野生型及异常转录本.FHIT 基因的异常转录率在宫颈癌组织为47% (14/30),高于癌旁正常组织20%(6/30)及正常宫颈组织13%(2/15),差异均有显著性(P<0.05).FHIT基因的异常转录与癌组织的生物学特性无关.DNA 测序证明异常转录本为FHIT基因多个外显子的缺失及DNA 序列的插入.结论FHIT基因的异常转录是宫颈癌组织及Hela细胞系中的常见事件,可能与宫颈癌的发生有关.
细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450 arom)能催化C19雄激素转化为雌激素，是雌激素合成的关键酶之一。P450 arom位于细胞内质网，在体内多种雌激素合成部位表达，如卵巢颗粒细胞、脂肪组织、胎盘合体滋养层细胞、脑细胞等。近年的研究发现P450 arom在子宫内膜上也有表达，能促进子宫内膜局部雌激素的转化，现对其在子宫内膜的研究进展综述如下。细胞色素P450芳香化酶的结构特征 P450 arom与其它细胞色素P450异构体的结构类似。C端为血红素结合区，该区含有保守的半胱氨酸残基，可作为含铁血红素的第5个配位配基。该区上游有2个保守区，一个由20个以上氨基酸构成，一个为高度保守的部分I螺旋。N端由疏水氨基酸组成，但在有些情况下，连接N端的是糖基序列［1］。 P450 arom是CYP 19基因的产物，是细胞色素P450产物中唯一由单基因编码的酶。CYP 19是细胞色素P450基因超家族成员之一。随着分子生物学技术的发展，对CYP 19基因的结构及调节有了较深入的了解。人CYP 19基因位于染色体15 q 21.1，该基因的开放阅读框包含9个外显子，II～X，其中翻译起始位点位于外显子II。基因至少长75 kb，在第一个编码外显子II上游有4个未翻译外显子，I.1～4，在最后一个编码外显子X上有血红素结合区(heme-binding region,HBR),同时，该外显子还有两个选择性多聚腺苷酸位点，可产生两种长度不等的转录产物，分别为3.4和2.9 kb(图1)。 CYP 19基因的主要特点是其具有组织特异性表达。用聚合酶链反应(PCR)和快速扩增互补DNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)检测发现，CYP 19基因在不同组织的转录产物5’末端不相同［3-4］。在胎盘组织，转录产物5’末端主要为未翻译外显子I.1，I.2<1%；在卵巢，5’末端为外显子II；而在脂肪细胞，不同条件下，有3种不同的5’末端，I.4、I.3和II。这种组织特异性在于该基因的组织特异性启动子调节。在胎盘，转录运用远端启动子I.1；在卵巢为近端启动子II；脂肪组织为启动子I.4、I.3及II。CYP 19基因这种运用选择性启动子调节组织特异性表达的特点，对人体不同部位雌激素的合成调节具有重要意义。
目的 探讨miR-295在前列腺癌组织及细胞株中的表达及意义.方法 选取我院前列腺癌样本65例,良性组织样本18例,前列腺癌细胞株PC-3、DU145及正常细胞株RWPE-1正常培养,提取组织miRNA,逆转录成CDNA,QRT-PCR检测miR-295在前列腺癌组织及细胞株中的表达.结果 同正常细胞株RWPE-1相比,PC-3、DU 145中miR-295的表达均下调,miR-295在前列腺癌组织中的表达显著低于良性组织.结论 miR-295在前列腺癌组织及细胞株中表达下调,可能为抑癌基因.
目的 观察腺病毒介导的miR-295对前列腺癌细胞增殖的抑制作用.方法 前列腺癌细胞系PC-3细胞培养后分实验组及对照组,实验组以腺病毒为栽体将miR-295转染,对照组常规培养,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA及蛋白的表达,MTT法检测细胞生长抑制率.结果 实验组转染24、48、72 h miR-295 mRNA的表达与对照组比较明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组细胞抑制率明显增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-295能够显著地抑制PC-3细胞的增值,miR-295具有抑制前列腺癌细胞增殖的生物学功能,可能成为新的治疗靶点.
随着转基因技术在高等生物中的广泛应用,转基因沉默受到越来越多的重视.转基因沉默可发生在转录和转录后两种水平.转基因的甲基化、重复拷贝以及与内源基因的同源序列都可以引起转基因的沉默现象.引起转基因的沉默机制有多种,本文论述了目前引起转基因沉默的主要机制和几点预防对策.
2011年10月11日,世界卫生组织《2011年全球结核病(TB)控制报告》显示,2010年全球结核病新发患者880万例,死亡145万例.虽较前有所下降,但下降过于缓慢[1],提醒我们结核病防治的工作仍任重道远.利福平是目前广泛使用的杀菌作用最强的抗结核药物之一,其通过结合依赖DNA的RNA多聚酶β亚单位抑制细菌RNA转录[2].但利福平自1966年开始应用于结核相关疾病的治疗至今,已有近50年的历史,出现了很多利福平耐药现象,情况已不容忽视.
Mtb核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而检测特定Mtb核酸序列或筛查特定Mtb基因的检测技术,常用检测技术有:PCR、连接酶链反应(ligase chain reaction,LCR)、转录依赖的扩增反应(transcription mediated amplification,TMA)等.笔者主要针对Mtb核酸扩增法检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制及临床研究的技术要求进行概述,为Mtb核酸扩增法检测试剂的研制提供参考.
狂犬病毒(rabies virus)是狂犬病的病原体,是一种包膜病毒,在分类学上属于弹状病毒科狂犬病病毒属.根据血清学和抗原性的关系,狂犬病毒分为4个血清型[1].血清Ⅰ型由经典的狂犬病毒组成,包括野毒株和固定株,血清Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型统称为狂犬病相关病毒.近年来,随着分子生物学技术的发展,在狂犬病毒的基因组结构、基因组复制、转录和调控等方面积累了丰富的资料,笔者就狂犬病毒分子生物学方面的研究进展进行了综述.
目的研究微波辐射与采用水浴加热,模拟微波辐射的人视网膜色素上皮细胞在细胞应激和凋亡相关基因转录的差异,探讨微波对培养的人视网膜色素上皮细胞基因转录的影响.方法应用基因芯片技术对2 450 MHz微波辐射、模拟微波辐射的人视网膜色素上皮细胞的mRNA进行检测.结果在97条有关应激和凋亡的目的基因中发现有7条基因转录上调,M31166基因上调2.52倍, L24123基因上调2.66倍,AF039704基因上调2.22倍,U67156基因上调2.07倍,AF040958基因上调2.13倍,NM-001423基因上调2.63倍,NM-005346基因上调3.68倍,未检测到转录显著下调的基因.结论微波辐射可引起培养的人视网膜色素上皮细胞中多个与应激和凋亡有关基因转录上调,微波辐射除了辐射引起的热作用外还存在微波辐射本身的作用.
目的 研究氯化镧(lanthanum chloride,LaCl3)对大鼠海马即刻早期原癌基因(c-jun)、早期生长反应基因1(early growth response gene 1,Egr1)和活性调节细胞骨架基因(activity-regulatedcytoskeletal gene,Arc)表达的影响,探讨LaCI3损害学习记忆能力的机制.方法 按完全随机化法将40只Wistar雌性成年大鼠分为对照组和低(0.25%)、中(0.50%)、高(1.00%)LaCl3染毒组,各组雌鼠10只,与5只雄鼠按2∶1比例交配.对照组和低、中、高剂量染毒组产仔鼠数分别是80、83、78、75只.各LaCl3染毒组仔鼠断乳前吸吮母乳染镧,断乳后饮用0.25%、0.50%和1.00%LaCl3溶液1个月.分别采用跳台试验测试仔鼠学习记忆能力,电感耦合等离子体质谱仪测定海马镧含量,RT-PCR法检测海马c-jun、Egr1和Arc mRNA表达,采用Western blotting法检测海马c-jun、Egr1和Arc蛋白表达.结果 低、中、高剂量组仔鼠在跳台测试时错误次数分别是(1.75±0.71)、(2.38±0.92)、(3.00±0.76)次,中、高剂量组均高于对照组的(1.25±0.46)次(q值分别为4.386、6.793,P值均＜0.05);潜伏期分别为(174.13±33.72)、(139.25±45.83)、(75.50±18.56)s,均低于对照组的(206.75±20.47)s(q值分别为2.958、6.121、11.902,P值均＜0.05).对照组和低、中、高剂量组仔鼠海马c-jun mRNA表达量分别为(0.89±0.08)、(0.77±0.12)、(0.58±0.14)、(0.29±0.11),c-jun蛋白表达量分别为(0.72±0.13)、(0.64±0.11)、(0.43±0.11)、(0.31±0.14),Egr1 mRNA表达量分别为(0.78±0.09)、(0.61±0.13)、(0.53±0.10)、(0.22±0.08),Egr1蛋白表达量分别为(0.65±0.18)、(0.40±0.15)、(0.32±0.13)、(0.14±0.09),均与染毒剂量具有剂量-反应关系,相关系数r值分别为-0.900(t=11.309,P=0.000)、-0.969(t=7.058,P=0.000)、-0.898(t=11.179,P=0.000)和-0.962(t=6.739,P=0.000).结论 LaCl3损害大鼠学习记忆能力的机制可能与其致海马c-jun和egr1基因和蛋白表达降低有关.
DNA依赖的蛋白激酶复合物(DNA-PK)是重组修复系统中最重要的组成部分,主要修复由电离辐射所引起的DNA双链断裂(DSBs),并且可以通过磷酸化多种蛋白质底物,广泛参与转录及细胞凋亡等过程.
<中国法院网>民事审判研究专栏在2002年6月21日发表了这样一篇文章:<从本案谈医疗机构的告知义务>.文中介绍了"国内鲜有"的案例.为便于说明问题,转录如下:"病人×××到×××武警医院施行左眼脂肪瘤摘除术.
目的:观察正常气虚证昆明小鼠甲状腺氧化磷酸化通路相关基因转录特征.方法:采用小鼠计量化辨证论治方法及Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,筛选正常气虚证昆明种小鼠检测其甲状腺基因差异表达的特征.结果:依据KEGG数据库小鼠氧化磷酸化通路与甲状腺芯片数据匹配后得到的85个基因,整体呈上调趋势,其中Ndufb3,Cox6b1、Atp5g3上调较为显著.结论:正常气虚证小鼠甲状腺氧化磷酸化通路相对表达量整体呈上调趋势,提示该通路总体处于比较活跃的代偿状态而非抑制.
博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)是引发新发神经系统感染性疾病病原体的一种,是一种非细胞溶解性,嗜神经性核糖核酸病毒.该病毒具有广泛的感染宿主,能感染从鸟类到灵长类的多种动物,并造成Borna病(Borna disease,BD),[1]临床以中枢神经精神行为功能障碍为特征,早期主要表现为行为改变、易激惹、步态紊乱,终末期表现为认知障碍、记忆丧失、抑郁、共济失调和部分麻痹等,但大多数感染动物为无症状性感染.
双生病毒(Geminiviruses)是一类具有孪生颗粒形态的植物病毒,颗粒大小约为18nm×30nm.双生病毒成员众多,大致可分为三个亚组.双生病毒通常以粉虱或叶蝉为媒介进行传播,侵染范围十分广泛,对农业生产造成巨大的危害.感病植株一般表现为花叶、曲叶、黄化等症状,严重地影响了植物的正常生长.最近几年,属于双生病毒亚组Ⅲ的棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)在印巴次大陆广泛流行,严重时可使棉花绝收.双生病毒基因组DNA为单链环状形式,长度约为2 400nt～3 000nt.对双生病毒基因组结构、遗传表达机制,及其分类和进化进行深入的了解,有助于揭示寄主植物与病毒相互间的作用方式,进而为防治由双生病毒引起的植物病害奠定基础.本文就上述内容的最新进展作一简要综述.
在大肠杆菌中表达了马铃薯Y病毒中国分离物(PVY-C)复制酶NIb基因,并制备了其抗血清.利用PCR定点突变方法使NIb基因移码-1位,构建了移码-1位NIb基因(UN)的植物表达载体.通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens LBA4404)介导转化烟草NC89,获得51株再生植株.对再生植株的分子检测结果表明,转基因烟草中检测到UN基因相应的RNA转录产物,推测该基因已经整合到烟草染色体中.攻毒试验发现转UN基因烟草(T0代)对两个PVY株系和烟草蚀纹病毒的抗病性与转全长、缺失5′端381bpNIb基因烟草(T2代)的相同.Western印迹试验结果表明,在本试验检测水平上,在转基因T2代烟草中未检测到NIb基因的表达产物.实验结果支持PVY-C复制酶NIb基因在转录水平上介导相对广谱抗病性的假说.
应用免疫组织化学和原位杂交方法检测人消化道癌患者胃肠道粘膜中的MUC2和MUC3基因蛋白产物和mRMA的表达,以提示MUC2和MUC3基因在人消化道癌患者胃肠道粘膜中的表达规律.结果发现,胃粘膜中无MUC2和MUC3基因产物的表达,MUC2核粘蛋白及mRNA主要存在十二指肠和结肠杯状细胞周及核上,柱状细胞中无表达.MUC3核粘蛋白及其mRNA主要存在十二指肠和结肠的杯状细胞和柱状细胞胞浆内,而杯状细胞的粘液滴内无MUC2、MUC3基因产物的阳性反应信号.提示,MUC2和MUC3基因主要在肠道粘膜中表达,而胃粘膜中不表达,是合成肠道粘液的主要粘蛋白基因.
磷酸核糖焦磷酸(phosphoribosylpyrophosphate,PRPP)是嘌呤和嘧啶合成的关键性调节因子.磷酸核糖焦磷酸合成酶(phosphoribosylpyrophosphate synthetase,PRS)是PRPP合成的催化剂.PRS1是PRS复合物的一个催化亚单位,其编码基因PRPS1位于X染色体.目前已发现在一些X染色体相关的人类疾病中PRS活性增强,而PRS1亚单位的点突变或正常PRS1的转录增强均可导致遗传性的PRS活性增高.
目的 探讨人类神经前体细胞中内源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的转录活性及增殖与分化相关调控机制.方法 采用系列hTERT基因启动子的荧光素酶报告载体和β-半乳苷酶表达载体,瞬时共转染HeLa细胞和hNPCs-G3细胞,检测不同长度启动子的活性.分析碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进增殖过程中hTERT基因启动子活性,分析cAMP诱导分化过程中hTERT基因启动子活性.结果 hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,主要依赖近端启动子区.bFGF上调hNPCs-G3神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,其调控主要作用在-2 098～-1 099bp区域和-3 216bp～-2 098bp区域内;cAMP 抑制hNPCs-G3神经前体细胞hTERT基因的转录,其调控主要作用在近端启动子区.结论 神经前体细胞内源性hTERT基因的转录活性较低,bFGF可上调神经前体细胞内源性hTERT基因的表达,cAMP则可抑制hTERT基因的转录.
核基因组与线粒体基因组的相互作用,以及两基因组在调控呼吸链亚基的表达机制方面一直处于探索阶段,线粒体核转录因子的发现,使细胞核调控呼吸链亚基表达的研究得到了很大的发展.本文就近年来对核呼吸因子和细胞核对呼吸链的调控机制研究作一介绍.
目的 检测雌、雄成虫猪蛔虫缺氧诱导因子转录水平的差异性,探讨猪蛔虫性别差异的分子机制,为蛔虫病的防治提供参考.方法 提取猪蛔虫雌、雄成虫总RNA,反转录合成cDNA,以蛔虫actin基因为内参,采用实时荧光定量PCR检测hif-1α和hif-1β基因的转录水平.结果 提取的RNA浓度为1.5-2.0 μg/μ1,A260/A280位于1.9-2.0之间.实时荧光定量PCR显示引物具有良好的溶解曲线和扩增曲线,检测雌成虫hif-1α和hif-1β基因表达的2-△△Ct分别为15.99±3.65和26.26±7.09,雄虫分别为1.02±0.06和1.01±0.05,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 猪蛔虫hif-1α和hif-1β基因转录水平雌成虫高于雄成虫,表明雌虫更能适应宿主体内低氧环境.
