Mtb核酸扩增检测技术泛指以扩增DNA或RNA为手段,从而检测特定Mtb核酸序列或筛查特定Mtb基因的检测技术,常用检测技术有:PCR、连接酶链反应(ligase chain reaction,LCR)、转录依赖的扩增反应(transcription mediated amplification,TMA)等.笔者主要针对Mtb核酸扩增法检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制及临床研究的技术要求进行概述,为Mtb核酸扩增法检测试剂的研制提供参考.
丙型肝炎病毒（ hepatitis C virus， HCV）感染是引起慢性肝病的主要原因之一。 HCV RNA检测对于HCV诊断、疗效监测以及治疗终点评估具有重要意义。目前，国内外广泛使用的HCV RNA定量检测试剂大多基于实时荧光定量PCR技术。由于标准品的不同，不同厂家仪器检测结果之间会存在较大差异，即使同一种方法，由于环境以及操作人员不同，反应自身扩增效率也会存在一定变化，造成结果存在差异。因此在实际临床工作中通常要求患者在不同时间点检测HCV RNA时，尽可能在同一个实验室，使用相同的检测方法，以保证结果的一致性［1-2］。此外，检测方法的灵敏性是评判检测技术的一个关键指标，具有重要的临床应用价值。微滴式数字PCR技术，是将样本通过微滴发生器进行微滴化处理，将PCR反应体系制成数万个皮升级大小的油包水液滴，以确保实现单分子扩增，在PCR扩增反应结束后，使用微滴检测器对每个微滴逐个检测，最后通过软件分析，计算靶分子的拷贝数［3］。由于该方法具有极高的灵敏度，因此目前该技术的应用方向主要集中在从外周血中获得分子生物标记物以及进行低频特异突变筛查等方面，有关其在病毒核酸定量检测方面的报道尚不多见［4］。为了评价该技术在HCV RNA定量检测中的应用价值，特别是其对低拷贝HCV RNA的定量能力，我们对微滴式数字PCR检测HCV RNA的性能进行了评价。
目的:研究KISS-1,hOT7T175基因在大肠癌组织表达及其与转移的关系.方法:大肠癌组织60例,采用逆转录聚合酶链式扩增反应对KISS-1,hOT7T175 mRNA的表达进行检测.结果:大肠癌组织和周缘正常组织KISS-1,hOT7T175阳性表达例数相比有显著差异(P=0.000和P=0.037).肿瘤Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期KISS-1阳性表达例数对比有显著差异(P=0.020).结论:KISS-1,HOT7T175有可能成为预计大肠癌恶性程度的一个指标.
连接酶链反应(Ligase Chain Reation,LCR)是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR技术的新方法.LCR既可扩增,又可鉴定DNA异常,与PCR技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查.
PCR是在体外选择性扩增特定基因片断的方法,被广泛应用于获取目的基因或基因片段及临床基因诊断等领域.但常规PCR无法对扩增反应实时(real-time)检测,通过借助电泳等手段对扩增终产物进行分析,不仅费时、费事、易污染,且无法对起始模板准确定量.
目前全球已发现β-地中海贫血(β-地贫)100种以上的点突变[1],中国人中发现21种.β-地贫的分子基础主要是点突变导致β-珠蛋白基因功能下降(β+)或丧失(β0),受累重型患儿多于未成年夭折,使高发区社会和家庭负担沉重.我国β-地贫最多见的基因突变为CD41-42(-TCTT)和IVS-2nt 654(C→T)突变,一般占突变的60%以上.本研究采用扩增反应突变系统检测法(ARMS)来检测这两种突变,通过一次PCR扩增即可检出.现总结如下.
沙眼衣原体(Ct)是性传播疾病重要的病原体之一,感染后可以不出现症状或无特异的临床症状,因此需要实验室检出病原体方能明确诊断.聚合酶链反应(PCR)、连接酶链反应(LCR)等核酸扩增方法可快速扩增靶DNA,为检测泌尿生殖道沙眼衣原体提供了一种敏感、特异的方法[1].但是,在各种临床标本中,经常存在核酸扩增反应的抑制物,可导致核酸扩增失败而出现假阴性结果[2].因此,标本处理方法能否有效去除核酸扩增反应抑制物,是影响咒R测定准确性的关键因素之一.
