纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌经发酵产生的一种丝氨酸蛋白酶,可用于溶栓药物的开发.本文比较了两种测定纳豆激酶活性方法:琼脂糖--纤维蛋白平板法和枯草杆菌蛋白酶活力测定方法,为快速、准确地标示纳豆激酶的效价提供技术支撑.
潮霉素磷酸转移酶(HPT)是转基因作物中重要的标记蛋白,其活性的测定对含有该标记基因的转基因作物的植株构建、基因沉默、标记基因去除及安全性分析等具有重要的作用.本文综述了潮霉素磷酸转移酶活性测定的几种方法,包括放射化学法、抑菌生长法及酶耦联法,其中放射化学法用于检测组织粗提蛋白中的HPT活性,而其他两种方法适用于纯化过的HPT蛋白活性的检测.
目的:探讨血清胆碱酯酶(CHE)活性测定在肝病患者中的临床应用价值.方法:对224例肝病患者及50例健康体检者进行血清胆碱酯酶活性测定.结果:各类肝病患者血清CHE活性均低于正常对照组.差异有显著性(P<0.05);急性肝炎组与另外3组肝病相比,差异有显著性(P<0.05);血清CHE活性降低程度与肝细胞受损程度相平行.结论:CHE活性是反映肝细胞损害的敏感指标,能准确地反映肝脏的病理损害程度,在肝病的诊断治疗及预后判断中是一项重要指标.
水蛭素活性测定方法目前主要有以chromonymTH为生色底物的比色法、光散射法和凝血酶滴定法.2005年版<中国药典>收载了用凝血酶滴定法测定水蛭药材中的水蛭素[1],其原理是水蛭素可与凝血酶以1:1比例结合,而凝血酶已有标准的国际单位NIH,因此可以用抗凝血酶活力单位ATU来表示水蛭素的活性,即1个ATU等于中和1个NIH凝血酶的水蛭素量.
目的:采用体外活性评价法,研究地龙基于膜分离技术抗凝血部位的制备工艺.方法:以蛋白质含量和酶活性为指标,采用单因素考察和正交试验优选地龙的提取、精制、浓缩工艺.结果:地龙体外抗凝血部位的制备工艺为地龙粗粉加入15倍量0.9%NaCl溶液,37℃超声提取3次,每次40 min;将上述提取液经30×103超滤膜进行精制,超滤液经10×103超滤膜进行浓缩.结论:超声提取技术与膜分离技术相结合,能够提高地龙抗凝血部位的分离纯化效果,有利于活性部位的进一步研究.
1998年12月-2004年12月,我院采用常规基础加中药治疗重症有机磷中毒(AOPP)22例,并与单用常规基础治疗的24例作对照,现报道如下.临床资料46例患者均为口服有机磷中毒,依据临床表现及胆碱酯酶(CHE)活性测定,符合重度有机磷中毒诊断标准.
目的 构建含B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体,转染肝癌HepG2细胞进行活性检测.方法 PCR扩增B7-H1启动子上游区域基因片段,并插入到含有荧光素酶报告基因的载体PGL3-Basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染HepG2细胞,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶表达活性.结果 成功地构建了6种不同长度的PGL3-B7-H1-Luc荧光素酶表达质粒,分别命名为P88、P175、P203、P398、P723和P960.瞬时转染HepG2后经报告基因检测,P175、P203、P398、P723和P960所含5段启动子均具有转录活性,IFN-y作用后启动子活性明显增强,而P88转染组IFN-y作用后,荧光素酶活性无显著变化.结论 成功构建了B7-H1启动子的荧光素酶报告基因载体.
黄芪具有补中益气的功效,近年来,用离体豚鼠乳头肌实验对黄芪各分离部份作活性测定,证实其具有正性肌力作用[1] ,而其强心有效成分为黄芪甙IV(XGA),但有关XGA对在体心衰模型的强心效应及与已知强心药的比较目前未见报道 ,本文旨在豚鼠心衰模型上观察XGA的强心作用,并与已知强心药米利酮、哇巴因作比较.
将广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2-1(APLA2-1)基因克隆至表达载体pET28a(+),转化入大肠杆菌BL21,经过诱导,SDS-PAGE检测,重组质粒pET28a-APLA2-1在18KD有一明显的表达条带,表达产物APLA2-1约占细菌总量30%,并以包涵体的形式存在,将产物变复性后用Sephadex G-75 纯化,产物经过SDS-PAGE检测只有单一条带,通过Western-blot检测,证实纯化产物是酸性磷脂酶A2.对表达的APLA2进行酶活性和药理活性的测定.至此我们在大肠杆菌中表达了广西眼镜王蛇毒APLA2,这将为以后对PLA2的结构与功能的研究打下了良好的基础.
静注人免疫球蛋白(pH 4)(IVIG)是我公司生产的具有多种抗体活性的血液制品,因具有广泛的应用价值而受到临床重视.其低pH值能更好地保证Fc段生物学活性,一般认为少量的IgG多聚体能暴露出Fc段补体结合位点,从而促使抗补体活性(ACA)产生[1-3].ACA是ICIG中一项重要的指标,它指IVIG中IgG多聚体在没有结合抗原的情况下,激活补体的能力.IgG多聚体通过激活补体使补体消耗,从而使机体的免疫防御能力下降.头痛、潮红、颤抖、背痛、恶心是较常见的不良反应症状[4].因此,ACA的高低对IVIG的质量起着至关重要的作用.据文献报道[5],影响AcA的因素可能与IgG多聚体含量、Na+浓度、pH值、葡萄糖的浓度有关.据此,我们进行了研究.另外,还研究发现枸橼酸含量对ACIA也有一定影响.本文就以上因素对其进行实验分析.
80年代初,人们通过实验阐述了自由基有致癌作用,并在致癌理论中提出了"自由基损伤理论".为了了解病毒感染在致癌和与体内自由基之间的相互关系,我们于1998年月12月至2000年9月对DNA诊断确认为EB病毒感染的12例鼻咽癌患者在手术前后分别做了血浆脂质过氧化物(LPO)含量和红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性测定,并与DNA诊断阴性的鼻咽癌患者进行了比较.
抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)主要是CD8+ T细胞,少数为CD4+ T细胞,CTL对抗原的识别及自身的活化受MHC分子的限制.抗原特异性CTL在抗感染免疫、移植物免疫和肿瘤免疫中发挥重要作用,定量分析抗原特异性CTL可为阐明免疫应答的自然发生过程提供重要信息,但是传统的检测分析方法均为间接的活性测定,费时费力.1996年Altman等[1]首创的可溶性MHC-肽四聚复合物法则能够直接定量检测抗原特异性CTL的比率,并通过流式分选用于其他方面的研究,操作简便,灵敏度、特异性很高,因而得到广泛应用.以下就其原理、应用及技术改进简述之.
糖尿病是全身性代谢性疾病，不仅存在糖、脂肪、蛋白质的代谢紊乱，还有骨代谢的异常。约50％的糖尿病患者伴有骨质疏松，但其发病原因及机理至今仍不十分清楚。我们测定了30例2型糖尿病患者血清酒石酸抗酸性磷酸酶(tartrate-resistantacid phosphatase，TrACP)的活性作为骨吸收的标志[1]，同时测定了血清骨碱性磷酸酶(bone alkling phosphatase，BALP)活性作为骨形成的标志，以及其它部分骨矿物质代谢参数：血钙(Ca)、血磷(P)等，从而对糖尿病骨代谢紊乱的机理作一些探讨。对象与方法1.对象：2型糖尿病患者30例，符合1985年WHO诊断标准。男13例，女17例，平均年龄56.3±10.2岁，平均病程5.3±5.5年。平均空腹血糖(FBG)10.85±4.12mmol／L，平均糖化血红蛋白(HbA1c)8.34±2.52％，肝肾功能正常，排除其它代谢性骨病。所有患者均用口服降糖药控制血糖，未服用影响骨代谢的药物。以年龄匹配的健康人30例为对照组，男15例，女15例，平均年龄55.6±10.8岁。 2.方法：TrACP活性测定用生化法，对硝基酚磷酸二钠盐由德国Merk公司生产。BALP活性测定用热失活法，对硝基酚由成都化学试剂厂生产。血Ca、P测定用全自动生化分析仪。FBG测定用葡萄糖氧化酶法，HbA1c测定用微柱法，空腹胰岛素(FINS)测定用放免法。 3.统计学处理：数据用均数±标准差(x±s)表示，采用t检验和直线相关分析。
患者男性,44岁.因咳嗽4个月,进行性劳累后气促,拟诊"喘息性支气管炎"于2002年2月18日收入院.曾按支气管哮喘治疗无明显好转.既往有2年"痛风"病史,曾查血尿酸高,未治疗;否认其他疾病.查体:血压100/77 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),呼吸25次/min.无口唇紫绀及杵状指(趾),双肺呼吸音粗,可闻及少许哮鸣音,无湿啰音.心率100次/min,律齐,三尖瓣区可闻及3级收缩期杂音.腹部及其他系统未见异常.实验室检查:白细胞数12.7×109/L,中性粒细胞0.60,淋巴细胞0.27.动脉血氧分压(PaO2)110.3 mm Hg(吸入氧浓度0.33),二氧化碳分压(PaCO2)28.9 mm Hg,pH值7.404,血氧饱和度98.4%.D-二聚体定量590.63 μg/L,血纤维蛋白原8.08 g/L,血尿酸正常,血培养腐生葡萄球菌,药敏显示耐甲氧西林葡萄球菌(+),对万古霉素敏感.抗凝蛋白酶Ⅲ活性测定正常;乙型肝炎病毒学检查为HBsAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+),余阴性.胸片:双肺纹理增多、紊乱、模糊,右上肺可见片状影,纵隔及心影未见异常.
患者，男性，25岁，因“右手指麻木无力2周”于2012年9月16日入院。患者2周前无明显诱因出现右手拇指、食指、中指第二节指麻木、无力，不能持物，后逐渐加重，累及右手无名指、小指，仍以拇指、食指、中指为重。2012年9月14日颅脑磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）示左侧额顶叶、岛叶脑梗死，部分出血性（见图1）。1月前无明显诱因反复出现左眼黑曚，持续数分钟可自行缓解，1小时内完全恢复，发作时与体位无关，无头晕头痛、视物模糊，无肢体麻木、无力，现无再发黑曚。患者6年前曾出现左足第二足趾疼痛、坏死，诊断为“血栓闭塞性脉管炎”，并于2006年3月切除病趾；吸烟2年，平均10支/d ，6年前术后戒烟至今，无嗜酒。查体：右上肢血压142/80 mmHg （1 mmHg=0.133 kPa），左上肢138/80 mmHg；双侧颈动脉未闻及杂音，双上肢桡尺动脉搏动较弱，双下肢胫后动脉、足背动脉搏动未触及；右上肢肌张力增高，上臂、前臂肌力5-级，指端肌力4+级；指鼻试验、回缩试验、快复动作阳性，腕关节水平以下感觉减退，Hoffmann征阳性；左下肢踝肱指数为0.83。血常规、生化及免疫检查：血沉2 mm/h、同型半胱氨酸11.64μmol/L、补体C30.967 g/L、补体C40.251 g/L、IgM 3.2 g/L、IgA 1.86 g/L、IgG 12.4 g/L，抗核抗体、抗中性粒细胞胞浆抗体阴性，纤维蛋白原（fibrinogen ，Fg）2.45 g/L、极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein，VLDL）0.33 mmol/L、血浆蛋白S（protein S，PS）活性测定73.6%、血浆蛋白C（protein C，PC）活性测定126%、血浆抗凝血酶Ⅲ活性测定（antithrombin Ⅲ，ATⅢ）92%、乳酸3.11 mmol/L。颈动脉椎动脉彩超检查示：双侧颈总动脉阻力指数增高。下肢动脉及深静脉彩超示：（1）左侧股总静脉下段、股浅静脉、腘静脉及胫后静脉血栓形成伴不全梗塞；（2）右侧股总动脉中-内膜增厚。
重症胰腺炎感染期体液TNFα变化与感染的关系，以及感染期TNFα的变化规律目前仍不清楚。我们对此研究的结果如下。 1．一般资料：1999年11月～2000年5月，21例全身感染期的重症胰腺炎患者，男12例，年龄(55.6±11.3)岁；女9例，年龄(63.0±16.2)岁。均行手术清除感染坏死及假性囊肿引流术，11例患者行胆道引流术。 2．方法：(1)分组：细菌培养阳性组和阴性组，分别比较两组所对应的血清TNFα活性；同时比较两组胆汁和尿内的TNFα；再分别比较正常人血清与细菌培养阳性组和阴性组的血清TNFα活性。(2)细菌培养和TNFα活性测定：当感染期患者诊断为全身炎症反应综合征(SIRS)时，即行胆汁、尿、创面和痰液细菌和真菌培养，同时行TNFα活性测定。TNFα活性(U/ml)采用L929细胞生化的分析法测定。(3)测定26例健康成人的血清TNFα作为正常值。
对62例氟乙酰胺中毒患儿及20例正常同龄儿进行CK-MB活性测定,并结合临床对其在氟乙酰胺中毒时心肌损害的价值进行探讨.
T细胞受体(T cell receptor,TCR)γδ表型细胞与TCRαβ细胞不同,识别抗原的方式类似于免疫球蛋白,以主要组织相容性复合体非限制性方式识别抗原分子[1,2],无需抗原呈递分子配合,直接识别广谱肿瘤抗原.我们以抗体固相法体外扩增7例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者及6例健康人外周血的γδT细胞,经原代NPC细胞同步培养,得到高纯度的NPC细胞.流式细胞仪检测γδT细胞纯度,研究两种来源的γδT细胞对Daudi、CNE1、CNE2和新建的传代培养NPC细胞的细胞毒作用,探讨NPC患者外周血中γδT细胞的抗肿瘤作用.
目的: 应用分光光度法建立一种简便、准确、灵敏、稳定的重组α-半乳糖苷酶(AGA)活性检测方法.方法: 利用紫外-可见分光光度计,根据产物生成量计算所测标本的酶活性.结果:该方法的批内变异系数为2.63%,批间变异系数为4.42%,均＜5%;在所检测该酶质量浓度范围(0.3～2.5 μg/ml) 内线性关系良好;每组的平均回收率均在95%～105%之间.结论:与已经建立的测活方法相比较,该方法具有无需酶的标准品,结果可靠、误差小、稳定性好、操作简单,适合实验室及工业化生产应用的优点.
目的：优化发色底物法，使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶（ AAT）的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响；计算初速度并确定被底物饱和的最大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育，剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线，测定相关样品的活性，进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0．0625 mg／ml，20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200～1200 IU／ml， r＞0．99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为（720．59±18．63）、（601．84±19．18）、（568．09±24．83）IU／ml。每个样品之间的RSD＜10％，加样回收率均在90％～110％。结论发色底物法经优化后，准确度和精密度大幅度提高，更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。
凝血酶是从猪血或牛血中提取的凝血酶原,经激活后而成凝血酶.凝血酶活性测定常用的底物有纤维蛋白原[1]、健康人血浆 [2]等,亦有报道用NPGB滴定法[3]测定其活性的.<中国药典>规定用纤维蛋白原(以下简称纤原)作为其活性测定的底物,但纤原存在来源不便,价格较贵等缺点.
基质金属蛋白酶在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中起重要作用,并与一系列的病理过程紧密相关.在体外测定基质金属蛋白酶的活性水平,对恶性肿瘤的诊断和预防具有重要意义,同时为小分子基质金属蛋白酶抑制剂的活性筛选提供有益的依据.主要的活性测定方法有化学法、酶谱法、免疫分析法、荧光底物法、高通量筛选法.对这些测定方法的原理、操作及优缺点进行了介绍及比较.
目的:建立血脂康的活性测定方法,用于血脂康的质量控制研究.方法:建立3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoA还原酶)酶促反应,即HMG-CoA还原酶量为3.125×10-4U,烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)量为160 nmol·L-1,羟甲基戊二酸单酰辅酶A (HMG-CoA)量为5 nmol· L-,反应时间为50 min的反应体系,加入洛伐他汀酸系列工作溶液,采用LC-MS/MS方法测定体系中产物甲羟戊酸的量,计算抑制率,得到洛伐他汀酸浓度-抑制率曲线.将血脂康样品溶液加入到酶促反应体系中,根据抑制率计算血脂康活性成分的含量.结果:洛伐他汀酸浓度为10～500 ng·mL-1范围内抑制效应显著,质量控制样品的准确度和精密度范围分别为95.28％ ～ 101.53％,7.08％～10.51％;平均加样回收率为100.25％,RSD为2.27％.检测得到3批血脂康胶囊活性成分的含量以洛伐他汀酸计分别为每粒4.86,4.71和4.56 mg.结论:建立的方法精密度好,准确度高,可用于血脂康胶囊的生物活性测定.酶法测定结果显著高于HPLC法的测得值,推测血脂康中可能有其他成份在同时发挥抑制HMG-CoA还原酶的作用.本研究结果对血脂康的质量控制具有指导意义.
目的:研究复方曲肽注射液活性测定方法.方法:通过体外血小板聚集试验确定其活性限值测定法.结果:通过对复方曲肽注射液不同体积以及不同批次血小板聚集试验显示此方法重复性差、限值制定较难,无法寻找一个统一的标准来衡量其抑制血小板聚集功能.结论:应用血小板聚集试验考察复方曲肽注射液活性测定方法欠妥,建议进一步探索更好的方法检验产品活性.
目的：探讨脯氨酸肽酶（PLD）在各种肝脏疾病中的临床诊断应用价值。方法应用比色法和放免法检测PLD和透明质酸（HA）、胶原IV（IV-C）、层粘蛋白（LN）、ALT等各种生化指标，并进行相关分析。结果急性肝炎PLD除与ALT 变化基本一致外，与其它指标均无明显相关性。慢迁肝组与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），但与急性肝炎慢活肝及肝纤维化和（或）肝硬化组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），慢活肝组PLD活性与ALT和HA基本一致，均明显升高；肝纤维化和/或肝硬化者PLD活性绝大多数升高，且与HA、IV-C和LN明显相关（P＜0.01）。结论 PLD活性变化对急性肝炎、慢活肝和肝纤维化和（或）肝硬化活动期的诊断具有一定的参考价值。
肌酸激酶(creatine kinase,CK)是诊断急性心肌梗死(AMI)的重要酶学指标之一,也是反映神经肌肉损伤的敏感项目,对心肌和骨骼肌疾病的诊断、治疗和预后判断同样有重要的参考价值,目前在临床上已经得到广泛的应用.本文概括介绍CK的生理功能、临床应用情况、注意事项以及测定结果溯源等几个方面的内容.
白血病细胞的多药耐药(MDR)的产生是导致化疗失败的主要原因.目前发现MDR的产生机制是多因素的,且有不同的耐药表型.核转录因子Kappa B(NF-κB)在细胞增殖和凋亡中起关键调控作用.为明确NF-κB是否与细胞MDR产生有关及葛根素是否通过抑制NF-κB活性而逆转耐药,我们观察了慢性粒细胞白血病急变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02的NF-κB活性,P糖蛋白(P-gp)、耐药相关蛋白(MRP)表达情况,以及葛根素干预前后NF-κB活性,P-gp、MRP表达的变化,为揭示白血病细胞耐药机制,寻求有效的逆转耐药药物提供实验依据.
结核性和恶性胸水鉴别常较困难，治疗和预后也截然不同。我们于1996年4月－1999年10月对64例结核性和恶性胸水患者进行胸水pH值、腺苷脱氨酶(ADA)、癌胚抗原(CEA)及脱落细胞检测，分析如下。1 材料与方法1.1 病例选择 34例结核性胸水患者，男26例，女8例，年龄(54±36)岁，经痰涂片、胸部X线片检查及临床抗结核治疗有效并随访2～3个月胸水明显吸收而确诊。30例恶性胸水患者，男23例，女7例，年龄(71±59)岁，其中鳞癌20例，腺癌8例，胸膜间皮瘤2例，均经纤维支气管镜、胸膜活检、胸部CT检查证实。1.2 检测方法每位患者治疗前均抽胸水进行pH值、ADA、CEA，脱落细胞检测。pH值测定采用pH试纸，ADA活性测定采用比色法，CEA测定采用放免法，胸水离心沉淀作Giemsa染色进行脱落细胞检查。
例1,女,24岁.自幼常有自发性鼻出血,月经持续时间长,量多.近来频繁出血导致贫血而就诊.查体:发育正常,营养中等,神清合作,皮肤黏膜苍白,巩膜无黄染,浅表淋巴结无肿大,心肺正常,肝脾未触及,四肢无畸形.其祖父和外祖母系姑表兄妹,均无出血史.血常规:红细胞2.15×1012/L,血红蛋白70 g/L,白细胞6.3×109/L ,血小板170×109/L,凝血时间9分钟.活化部分凝血活酶时间31.8秒(正常对照31秒),凝血酶原消耗时间59秒(正常对照26秒),凝血酶原时间40秒(正常对照12秒),凝血酶原延长纠正试验:患者血浆加正常血浆为14秒,患者血浆加正常血清为16秒,患者血浆加正常吸附血浆为32秒.蝰蛇毒磷脂时间11秒(正常对照13秒),蝰蛇毒稀释时间13秒(正常对照13秒),蝰蛇毒复钙时间13秒(正常对照13秒).纤维蛋白原3.24 g/L.血小板聚集功能:二磷酸腺苷诱导的血小板聚集率为58.1%.因子Ⅶ活性测定12%.肝功能检查正常.
就慢性支气管炎和支气管扩张患者痰液颜色与中性粒细胞炎症反应物,包括形成痰液绿色的绿过氧化特酶(MAO)水平的相关性进行了研究.方法经高分辨CT确诊的扭曲状或柱状支气管扩张患者14例,因吸烟引起慢性咳嗽、咳痰但不伴有支气管扩张的患者7例.2个月研究期内病情稳定.采取静脉血样每月1次,共4次,留取采血当天晨间4小时和第2～4次采血日前24小时痰液.痰液颜色根据标准色卡分为9级,0级为水样透明,8极为深绿色.MAO活性测定采用发光底物法.白细胞弹力酶的提纯和确定采用SDS丙烯酰胺琼酯泳和免疫印迹法.并测定痰液、组织蛋白酶、白介素8(IL-8)、白三烯B4(LTB4)、α1抗胰蛋白酶和分泌型蛋白酶抑制剂(SLPI)等.
