目的 获取有生物活性的丁肝抗原蛋白,探讨其作为诊断试剂的应用价值.方法 经密码子优化,合成人工编码的丁肝抗原基因序列；以M48作为表达载体,构建带有硫氧还蛋白的重组表达质粒；在大肠埃希氏菌中经IPTG诱导表达；以亲和层析纯化并以ELISA鉴定该蛋白.结果 酶切鉴定构建的质粒正确；SDS-PAGE结果显示表达和纯化的外源蛋白与预期相对分子质量大小一致；ELISA鉴定该蛋白有与丁肝抗体特异性结合的活性.结论 成功获得有生物活性的可供诊断用的丁肝抗原蛋白,为丁肝诊断试剂的研发奠定了基础.
背景: 2003年研究发现一个全新的Ⅲ型干扰素家族,即IFN-λs,包括λ1,2,3 三种亚型.目的;对在毕赤酵母中高效表达重组人干扰素-λ1(rhIFN-λ1)进行产率纯度分析.理化性质、受体表达鉴定以及抗肿瘤活性初步探讨.设计、时间及地点: 单一样本观察,于2006-09/2008-07在中国医学科学院基础所生物化学与分子生物学系完成.材料: 含rhIFNλ1表达质粒的酵母菌种pAO815-4 α F-IFNλ1/GS115,人宫颈癌细胞系Hela细胞和HCT116细胞,为中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室保存.方法: 诱导含rhIFN-λ1表达质粒的甲醇营酵母Pichia pastoris进行表达,表达产物经阳离子交换层析及凝胶层析纯化.主要观察指标: 通过HPLC,质谱,毛细管电泳等鉴定其纯度及理化性质,反转录-聚合酶链反应及real-time荧光定量聚合酶链反应鉴定其在肿瘤细胞中特异受体的表达,应用四甲基偶氮唑盐比色法初步评价其抗肿瘤活性.结果: 毕赤酵母表达的rhIFN-1表达水平约9.23 mg/L,纯化后的纯度近90%.rhIFN-λ1等电点为8.01,相对分子质量为20 960.在Hela和HCT116中均检测到rhIFN-λ1受体小亚基IL-10R2和特片大亚基IL-28RmRNA的表达,但U937细胞中末检测到IL-28RmRNA的表达.rhIFN-λ1具有与IFN-α 2a相似的降低细胞增殖的作用,但在经检测无或极少表达IL-28R的细胞中此作用不明显.结论: rhiFN-λ1可以在毕赤酵母中实现高效表达,表达产物的理化性质与天然IFN-λ1一致,具有与IFN-α 2α相似的抗肿瘤活性,但对其特异受体分布少的骨髓造血系统降低增殖作用相对较弱.
目的 研究单次及重复应激对大鼠行为及部分脑区单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法 采用限制应激模型(6h·次-1·d-1,重复应激连续10d).采用空场试验、高架十字迷宫试验评估大鼠焦虑水平,高效液相色谱法检测大鼠前额叶、海马和下丘脑的单胺类神经递质.结果 与对照组比较,单次应激组在空场实验中央格停留时间少(P<0.01),在高架十字迷宫实验闭臂停留时间多(P<0.01)、开臂停留时间少(P<0.01);重复应激组在中央格停留时间、在开/闭臂停留时间与对照组差异有显著性(P>0.05).递质分析表明,与对照组前额叶5-羟色胺[(245.84 4-31.32)ng/g]、5-羟吲哚乙酸[(200.69±38.47)ng/g]比较,单次应激大鼠前额叶[(314.05±31.31)ng/g,(286.32±30.10)ng/g]水平较高(P<0.01);与对照组海马[(182.16±16.48)ng/g,(284.13±63.86)ng/g]比较,单次应激组海马[(282.21±18.98)ng/g,(502.82±77.98)ng/g]水平较高(P<0.01);与对照组相比,重复应激组海马[(314.15±17.42)ng/g,(576.17±51.05)ng/g]较高(P<0.01).结论 大鼠单次应激产生明显的应激反应,而重复暴露于相同负性事件能够导致对应激的适应;海马5-HT释放的增加可能是应激适应的神经生物学基础.
目的:采用高效液相色谱法测定拮新康胶囊中甲基莲心碱含量.方法:采用pdarisC18-A色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),以甲醇-水-三乙胺(70:30:0.05)为流动相,流速为1.0mL·min-1,检测波长为282nm.结果:甲基莲心碱的含量线性范围为113～1130ng·mL-1,平均回收率为97.33%,RSD为2.0%.结论:该方法简便、准确,可用于控制拮新康胶囊的质量.
目的:建立气相色谱法测定三七伤药片中冰片的含量方法.方法:采用气相色谱法FID检测器;采用弹性石英毛细管柱(PEG-20M)(柱长30m,内径0.320mm,膜厚度0.50μm);程序升温:初始温度120℃,保持1min,以每分钟10℃的速率升温至180℃,保持3min;进样口温度为220℃,检测器温度为250℃;分流比为5:1.结果:冰片浓度在0.0506～4.9024mg/mL范围内线性关系良好,加样回收率为95.83%(RSD=1.30%).结论:本方法简便、准确,重复性好,可用于三七伤药片的质量控制.
目的:通过本方法和中国药典2005年一部三七项下的含量测定方法比较,建立一种快速、简便、准确的测定三七中三种皂苷含量的方法.方法:采用反向高效液相色谱法,梯度洗脱测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量,色谱柱Phenomenex C18柱,以乙腈为流动相A,水为流动相B,采用梯度洗脱,流速1.0ml·min,检测波长203nm.结果:该方法的测定比中国药典2005版三七项下的测定节省时间,同时经过对本方法系统的发法学研究,结果本方法线性关系良好,平均加样回收率分别为98.9% ,99.2%,98.7%;RSD分别为1.4%,1.9%,1.7%(n = 6),结论:本法快速、简便、灵敏和分离度好,适用于三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定,可以做为中国药典2005版三七中三种皂苷含量测定的提高研究.
