目的全细胞式膜片钳技术研究豚鼠结肠平滑肌细胞的L型钙通道特性,以加深对胃肠动力调控的认识及有利于胃肠动力药物的开发.方法豚鼠,200～400g,木瓜蛋白酶酶消化法分离结肠纵肌细胞.全细胞膜片钳法记录单细胞的钙通道电流.

肥大细胞数目增加及其介质浓度在体液中的增高已发现与支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎及关节炎等疾病有关.但是,迄今为止研究人类肥大细胞体外激活及抑制的手段却十分有限.本研究采用的酶消化法悬浮肥大细胞技术,具有加样均匀、重复性好、经济、省时等优点;并可与多种其他类型细胞相混合,因此,既能用于观察对肥大细胞的直接刺激,又能观察间接刺激.

目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCV RNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCV RNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCV NS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCV NS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.

目的：探讨新生大鼠心脏成纤维细胞（CFs）的原代培养方法及脂质体转染条件的优化。
　　方法：酶消化法原代培养CFs，倒置显微镜下观察细胞生长状态，免疫细胞化学染色鉴定CFs，并采用脂质体转染原代CFs，流式细胞术检测转染率。

吸烟是COPD的主要致病因素,气道重塑是COPD患者出现持续气流受限的主要病理基础.尼古丁占烟草生物碱总量的95％以上,尼古丁对COPD发病,特别是对气道重塑有着重要影响.我们以原代培养的人气道上皮下成纤维细胞为研究对象,观察尼古丁对成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响,以探讨尼古丁在COPD气道重塑中的作用.材料与方法癌周正常肺组织取自广州医学院第一附属医院胸外科2010年1-6月手术治疗的40～60岁肺癌患者,进行细胞原代培养及鉴定[1],分离正常支气管组织后用酶消化法及差速贴壁法获得支气管成纤维细胞,用含有100 U/L青霉素、100 mg/L链霉素和10％胎牛血清的DMEM/F12培养基,置于95％空气、5％ CO2和37℃孵育箱中常规培养及传代.

目的：比较组织块培养法、酶消化法及平板离心法获取角膜缘干细胞的不同。方法：取得人组织，分别应用组织块培养法、酶消化法及平板离心法获得角膜缘细胞并进行原代细胞培养，对获得的细胞通过免疫组化方法研究其p63、ABCG2及K3表达情况，以比较上述3种方法的不同之处。结果：3种方法均可获取大量阳性表达p63、ABCG2及阴性表达K3的细胞，符合角膜缘干细胞特点，但其中组织块培养法中阴性表达p63的细胞略多，并偶见阳性表达K3的细胞；另外，在提取细胞的实验操作方面，组织块培养法耗时约7天，酶消化法耗时约1天，平板离心法耗时约2天；在获得细胞量方面，1枚人角膜缘材料酶消化法可获得的细胞数量在此3种方法中通常最少。结论：平板离心法在目前常用的人角膜缘干细胞提取方法中可能是最具优越性的。

目的用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞,进行体外培养和功能鉴定,观察用17β-雌二醇(17β-E2)和雌激素受体拮抗剂ICI182780处理后,成骨细胞中护骨素(OPG)的表达变化.方法用胰酶-胶原酶消化法从正常人松质骨中分离培养成骨细胞,I型胶原染色用Van Gieson法,钙化结节用茜素红染色,用钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶的表达,骨钙素和OPG基因的表达用RT-PCR检测,OPG蛋白用Western Blot检测.结果用酶消化法分离的人成骨细胞,在体外培养时可维持合成I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素,并形成钙化结节等功能;体外培养的人成骨细胞表达OPG,17β-E2上调其表达,并能被雌激素受体拮抗剂ICI182780阻断.结论用酶消化法进行人成骨细胞培养,方便易行,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用;17β-E2上调OPG表达,而绝经后雌激素缺乏时,OPG的表达相应减少,可能是骨质疏松的发病因素之一.

人口腔粘膜上皮角朊细胞的原代培养有许多困难，其中主要是上皮细胞接种成活率、产量和成纤维细胞污染的问题。我们比较酶消化法和组织块法建立口腔粘膜上皮角朊细胞体外培养模型，并用免疫组织化学法进行培养细胞的定性研究。 1．材料：培养物来源于5个月～10岁唇裂患者修复术中的口内粘膜。切取唇内侧粘膜组织修复剩余物若干，每块约0.5 cm×0.5 cm大小。 2．方法：①酶消化法：用D-Hanks液冲洗粘膜块，剪切至0.2 cm×0.2 cm大小。配制0.3 kg/LⅠ型胶原酶和0.4% Dispase消化液的混合液（1∶1）5 ml，将粘膜块放入其中，密闭放入4℃冰箱内12～20 h。将表皮从基底撕脱，放入5 ml 0.25%胰蛋白酶液中吹打5 min，终止消化。低速离心5 min，去上清，加入5 ml含15% 胎牛血清的基础培养液中，制成细胞悬液并调整细胞数目在5×108/L，接种于25 ml培养瓶中。②组织块法：将肉眼可见的粘膜下组织尽量去除。剪切至0.1 cm×0.1 cm大小，用探针将小组织块以0.5 cm的间距放于25 ml培养瓶内用多聚赖氨酸处理过的小盖片。轻轻翻转，放入37℃温箱2～4 h，加入2 ml含15%胎牛血清的基础培养液，轻轻翻转培养瓶，使培养液浸没组织块，静置培养，每周换液2次。

目的 采用酶消化法建立成熟人破牙细胞分离和培养方法,为探讨破牙细胞的组织形态学特点及生物学特性奠定基础.方法 采用酶消化法从新鲜离体乳牙中分离获得破牙细胞,结合相差显微镜、苏木素-伊红(HE)染色、特异性抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase staining,TRAP)染色和扫描电镜对破牙细胞进行组织形态学观察和硬组织吸收功能鉴定.结果 采用酶消化法可分离得到成熟的破牙细胞,形态学上表现为多核巨细胞、有多个伪足；TRAP染色结果显示破牙细胞胞质呈酒红色阳性着色；扫描电镜下观察可见与细胞共培养的牙硬组织薄片表面有吸收陷窝形成.结论 应用酶消化法可以从离体吸收乳牙中成功分离获取人破牙细胞,可为探讨人乳牙根吸收机制提供细胞模型.

目的 建立一种人脑胶质瘤细胞原代培养的改良酶消化法.方法 基于文献并结合实际工作中经验,改良既往文献报道的酶消化法,对32例不同级别的胶质瘤进行消化后行原代细胞培养,通过倒置相差显微镜观察肿瘤细胞的形态学特点,传代时采用差速贴壁法对原代细胞进行纯化.采用细胞免疫荧光法对原代细胞进行鉴定,通过细胞增殖实验(CCK-8法)绘制生长曲线,研究体外培养细胞的增殖情况.结果 采用改良的酶消化法成功培养28例,失败4例,成功率为87.5％.培养成功的细胞贴壁生长,细胞状态稳定,形态各异,生长状态良好,并可传代.细胞免疫荧光检测显示胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阳性,证明培养的细胞为胶质瘤细胞;细胞增殖实验显示细胞在体外增殖活跃,肿瘤病理级别越高,细胞增殖能力越强.结论 改良的酶消化法用于人脑胶质瘤细胞原代培养具有简单、高效、成功率高等优点.

目的:观察阿片类药物是否对体外培养正常女性成骨细胞增殖有影响.方法:用胰酶-胶原酶消化法从正常女性松质骨中分离培养成骨细胞,用茜素红染色法、改良Gomonri钙钴法鉴定成骨细胞;制备不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮,作用于体外培养的成人正常成骨细胞上,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测吗啡对其的影响;通过RT-PCR法半定量分析不同浓度的吗啡及其拮抗剂纳洛酮对成骨细胞骨钙素(BGP mRNA)表达的影响.结果:用酶消化法分离的人成骨细胞,在体外培养时可合成碱性磷酸酶(ALP)、形成钙化结节.不同浓度的吗啡组与对照组OD490(optical density,OD)值相比差异有显著性(P<0.001);1×10-7 molL-1、1×10-6 molL-1、1×10-5 molL-1和1×10-4 molL-1吗啡组的细胞增殖速度依次降低(P＜0.001);而吗啡(10-5 molL-1)+纳洛酮(10-5 molL-1)组与对照组OD490值相比差异不明显(P>0.05).吗啡作用24 h呈剂量依赖性抑制BGP mRNA的表达.结论:用酶消化法进行人成骨细胞培养,简捷易行,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用;外源性阿片类药物吗啡可直接抑制人成骨细胞的增殖.阿片类物质可以抑制成骨细胞内BGP mRNA的表达.

目的:采用酶消化法培养老龄SD大鼠血管平滑肌细胞,为血管疾病,特别是为动脉粥样硬化研究提供大量的原代平滑肌细胞.方法:无菌取老龄SD大鼠主动脉,0.2%Ⅱ型胶原酶消化分离细胞.采用自然纯化、差速贴壁纯化平滑肌细胞,免疫组化鉴定平滑肌细胞α肌动蛋白.结果:免疫组化染色显示细胞纯度在95%以上.结论:酶消化法分离获取SD大鼠平滑肌细胞方法简单,易掌握,采用本方法可稳定获得大量的平滑肌细胞供实验使用.

脂肪干细胞作为种子细胞广泛应用于组织工程中，而获得足够量的、活性高的、高纯度的脂肪干细胞是其在组织工程中应用的前提。本文综述近几年来脂肪干细胞分离纯化方法的研究进展，比较各方法的优缺点，为分离纯化出理想的脂肪干细胞提供理论依据。

目的 探讨酶消化法和组织块法是否影响牙周膜细胞的特性.方法 培养牙周膜细胞,检测克隆形成能力及细胞周期分析,Stro-1的表达,实时定量RT-PCR检测.结果 酶消化法培养的PDLCs+G2M明显高于组织块法的PDLC;酶消化法培养的PDLC克隆形式能力明显高于组织块法培养的PDLC;酶消化法培养的PDLC Stro-1的表达明显高于组织块法培养的PDLC;酶消化法培养的PDLC成骨标志物的表达明显高于组织块法培养的PDLC.酶消化法培养的牙周膜细胞具有更强的增殖能力和间充质干细胞含量更多,成骨标志物表达更强.结论 酶消化法和组织块法影响牙周膜细胞的某些特性.

[目的]采用改良胶原酶法体外培养大鼠颅骨成骨细胞.[方法]取新生24 h SD大鼠颅骨,剔净后剪成碎块.依次以0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA和0.1% Ⅰ型胶原酶消化后,培养于α-MEM培养液中.倒置显微镜下观察形态学变化,钙钴染色法检测ALP活性,茜素红染色法观察矿化结节的形成.[结果]培养的细胞具有典型的成骨细胞形态特征,碱性磷酸酶呈阳性.[结论]采用改良胶原酶法培养的成骨细胞操作简便,成活率高,细胞具有典型的成骨细胞形态特征,且成分较单一.

人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDL)是牙周组织中重要的细胞成分,其可产生胶原纤维,能合成胶原并释放到胞外基质,对牙体组织有着重要作用.基于牙周膜细胞的重要角色, 广大学者对HPDL 的研究数不胜数,而体外培养是研究HPDL 体外模型的一种主要方法,传统的细胞体外培养方法有酶消化法和组织块法.

神经干细胞(NSCs)是具有自我更新和多向分化能力的细胞,存在于胚胎、胎儿和成人的脑室下区、齿状回、纹状体、室管膜下区等部位.通过机械分离或酶消化法能从其存在部位分离出NSCs.当培养基中表皮生长因子(EGF)和成纤维生长因子(bFGF)浓度均为20 ng·mL-1时,NSCs能通过对称分裂和不对称分裂在体外增殖,当培养基中bFGF浓度为1～10ng·mL-1时,NSCs可向神经元和胶质细胞分化.目前,表达Nestin、自我增殖和多潜能分化能力是鉴定NSCs的三大条件,但还没有NSCs特异性的鉴定方法.

背景:牙周膜细胞培养是牙周细胞生物学研究的基础.牙周膜细胞原代培养因其成功率较低,一直是制约牙周细胞生物学研究的瓶颈之一.如何寻找一种简单有效的培养方法,提高原代培养成功率一直是近年来牙周细胞生物学的研究热点之一.目的:比较组织块法、酶消化法、酶消化结合组织块法对人牙周膜细胞的培养效果,探索一种更有效的人牙周膜细胞的体外培养方法.方法:取58例正常恒牙牙周膜组织,随机分为3组,分别采用组织块法、酶消化法、酶消化结合组织块法进行原代培养,再进行传代培养、倒置显微镜下观察细胞生长情况以及细胞形态;免疫组织化学鉴定波形蛋白与角蛋白;取第4代细胞,绘制生长曲线.结果与结论:酶消化结合组织块法培养成功率(35%)明显高于其他两种方法(11%和21%).3种方法获得的细胞均符合正常人牙周膜细胞形态学特征和生物学特征,生长良好.第4代细胞生长曲线均为近似的"S"形,有明显的滞留期、对数生长期和平台期.提示实验建立的酶消化结合组织块法较为简单并具有较高的成功率,是一种培养牙周膜细胞的可行办法.

背景:国内外获得原代人正常膀胱上皮细胞的方法包括酶消化培养法、刮削培养法、组织块培养法,这些方法各有优缺点,培养基中成分多不易把握,效率不高.目的:分析人膀胱上皮细胞原代培养的最佳方法.方法:在同一实验条件下,采用酶消化培养法、刮削培养法、组织块培养法3种不同的原代细胞培养方法培养人正常膀胱黏膜膀胱上皮细胞.结果与结论:酶消化培养法、刮削培养法、组织块培养法各组膀胱上皮细胞培养成功率分别为13.3%,26.7%,86.7%,3组间比较差异有非常显著性意义(P < 0.001).3组培养的人膀胱上皮细胞角蛋白AE1/AE3荧光染色均呈阳性.说明组织块培养法是一种简单,短期内可扩增出较多纯净的膀胱上皮细胞的原代培养方法.

背景:目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用.目的:探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响.方法:将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12 h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12 h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,最后转入核酸酶溶液中浸泡12 h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精一伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果.结果与结论:3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用最大.提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法.

背景:脱细胞真皮基质已广泛应用于器官或组织缺损的修补.目的:观察猪脂肪源性干细胞与脱细胞真皮基质的相容性.方法:酶消化法原代培养猪脂肪源性干细胞,利用流式细胞仪和多向诱导分化方法鉴定脂肪干细胞,将其与脱细胞真皮基质共培养.结果与结论:实验成功培养出猪脂肪源性干细胞,流式细胞仪检测结果显示阳性表达CD44和CD105,不表达CD34和CD45;在诱导培养基条件下,可向脂肪细胞、成骨细胞分化.苏木精-伊红染色及扫描电镜发现干细胞能在脱细胞真皮基质表面黏附生长.脂肪源性干细胞与脱细胞真皮基质具有良好的相容性,将两者体外复合培养后,有望将复合物植入体内进行缺损组织、器官的修复.

背景：间充质干细胞具备多向分化潜，能促进细胞植入和免疫调节，研究人脐带间充质干细胞分离鉴定方法及移植后对肺癌小鼠化疗的影响能为肺癌治疗提供新的思路。
　　目的：观察人脐带间充质干细胞分离、鉴定方法及移植后对肺癌小鼠化疗的影响。
　　方法：取新鲜的新生儿脐带，利用组织块培养法和酶消化法分离、鉴定人脐带间充质干细胞。将Balb/C裸小鼠肺癌模型20只，随机分为化疗组和人脐带间充质干细胞移植组，两组均给予化疗治疗，人脐带间充质干细胞移植组化疗期间联合移植人脐带间充质干细胞治疗。
　　结果与结论：①瘤质量、肠黏膜组织形态及血常规指标：与单纯化疗的肺癌模型小鼠相比，人脐带间充质干细胞移植组胃肠道红润、有光泽，肠黏膜光滑、完整，瘤质量和血常规指标稳定(P<0.05)；②结果证实：通过组织块培养法和酶消化法能获得成熟的人脐带间充质干细胞，与化疗联合应用可明显减少胃肠道的损害，稳定外周血象。

背景：目前血管内皮细胞原代获取方法中，使用较多的就是大动脉血管内皮细胞培养及微动脉血管内皮细胞培养，传统多采用酶消化法及组织贴壁法，所获得血管内皮细胞数量和纯度已经不能满足科研实验的需要。
　　目的：探讨兔主动脉血管内皮细胞的原代的改良提取及鉴定方法。
　　方法：切取一段兔主动脉，甲组采用改良提取法培养血管内皮细胞，显微器械剥离出血管内层，再用酶消化法获得单个原代细胞，以内皮细胞培养液培养；乙组采用组织贴壁法生长，整个血管内面贴于培养皿中，同时于体积分数5%CO2，37℃温箱中孵育1 h。分别获得2组细胞沉淀并进行体外培养。采用显微镜观察细胞形态，通过免疫组织化学染色检测CD31、Ⅷ因子及Vimentin蛋白进行血管内皮细胞鉴定，并与组织贴壁生长法培养对比。
　　结果与结论：采用改良提取法得出的内皮细胞纯度比组织贴壁生长高，数量更多。免疫组织化学鉴定结果CD31(+)，Ⅷ因子(+)，Vimentin蛋白(-)。结果表明此法可以更容易获得纯度较高，数量更多的血管内皮细胞，可操作性及实用性较强。

背景:获取高纯度、高活性的成骨细胞是进行骨代谢研究的基础.目的:探索一种简便、高效的原代成骨细胞培养方法.方法:将新生24 h内的SD大鼠,分离获取颅骨的顶骨和额骨,预先采取胰酶和胶原酶消化,再进行组织块培养的方法提取成骨细胞.通过倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态,细胞计数绘制细胞生长曲线,采用碱性磷酸酶BCIP/NBT染色和茜素红矿化结节染色进行成骨细胞鉴定.结果与结论:①细胞形态呈长梭形、三角形、不规则多边形,有两至三个细胞突起;②透射电镜下线粒体和内质网在成骨细胞中非常丰富,并且有较多细胞突起,呈现出典型成骨细胞特点;③细胞刚接种时生长缓慢,3 d后增殖加快,第7天达高峰;④碱性磷酸酶BCIP/NBT染色显著阳性,茜素红钙结节染色橘红色;⑤采用酶消化法联合组织块法提取的细胞具有典型的成骨细胞特征和功能,是一种理想的原代成骨细胞分离培养方法.

背景：如何获得大量稳定活力好的细胞是人脐带间充质干细胞培养的难点。
　　目的：通过组织块法、酶消化法和酶解组织块法3种细胞培养方法比较，筛选出最佳的人脐带间充质干细胞的培养方式。
　　方法：分离新鲜脐带10根，分别采用组织块法、酶消化法、酶解组织块法3种方式培养人脐带间充质干细胞，比较3种方式原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间、细胞培养成功率、绘制细胞增殖曲线，利用流式细胞仪检测细胞表面标志，并进行多项分化能力检测。
　　结果与结论：酶解组织块培养法原代人脐带间充质干细胞爬出所需时间与酶消化法无显著差异，但明显短于组织块法(P <0.01)，原代人脐带间充质干细胞培养成功率显著高于其他两组，人脐带间充质干细胞增殖情况3组无显著性差异，酶解组织块培养法培养的第3代人脐带间充质干细胞其细胞表面标志及多项分化能力符合间充质干细胞的特性。酶解组织块培养法能缩短原代人脐带间充质干细胞爬出时间，显著提高原代人脐带间充质干细胞的成功率。

目的 为了深入研究大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)的作用及其调控因素,分离纯化大鼠睾丸Sertoli细胞并进行体外培养.方法 利用多重酶消化法,获取睾丸Sertoli细胞,进行体外原代培养以维持其良好的活性.结果 利用多重酶消化法,可以获得较高纯度的Sertoli细胞,并进行体外原代培养,最终获得大量活性良好的Sertoli细胞.结论 采用多重酶消化法和体外原代培养可以分离纯化并保持良好活性的大鼠睾丸Sertoli细胞.

目的 探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点.方法 采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定.倒置显微镜下进行形态学观察,取第2代RSGC,FDA-PI双色荧光法检测细胞活力,MTT法绘制生长曲线.结果 细胞角蛋白-8染色阳性.倒置显微镜下,细胞主要呈3种形态,为圆形亮细胞、多角形暗细胞、梭形暗细胞.细胞活力＞95%,生长曲线表示细胞5 d开始进入对数生长期.结论 此方法简便,易操作,获得了大量的RSGC,为颌下腺细胞作为种子细胞的颌下腺组织工程研究提供了实验基础和理论依据.

目的探讨理想的成骨细胞培养和鉴定方法.方法同时采用多次胶原酶消化法及骨片贴附法获得成骨细胞,应用Gomori改良钙钴法和在此基础上苏木精复染法做成骨细胞鉴定,通过做成骨细胞动态形态学观察和生物学鉴定,比较不同细胞培养法和鉴定法.结果多次胶原酶消化法获得的成骨细胞数量更多,纯度更高,密度更均匀一致,多数细胞处于同一个生长周期;在改良钙钴法基础上做苏木精复染,成骨细胞结构更清楚,棕黑色颗粒分布位置更清晰可见,和阴性对照比较差异更显著.结论多次胶原酶消化法获得的成骨样细胞更适于做体外实验研究模型;采用苏木精复染法做成骨细胞鉴定更有效.

目的:通过原代培养乳鼠皮层神经元,为脑血管疾病的研究提供实验模型.方法:酶消化法原代培养出生1天Wistar乳鼠的皮层神经元,利用免疫细胞化学和免疫荧光方法进行鉴定.结果:培养的细胞贴壁生长,胞体饱满,突起较长.免疫细胞化学染色显示神经元特异性烯醇化酶阳性细胞达85%,免疫荧光显示胶质细胞酸性蛋白阳性细胞达15%.结论:酶消化法原代培养乳鼠皮层神经元是一种可靠、稳定的获得神经元的方法.

[杨林,陶天遵,刘枫晨,等.中华骨科杂志,2001,21(8):493]目的研究地塞米松对体外培养的成人成骨细胞增殖和分化的影响 .方法取成人的髂骨松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,获得松质骨中的成骨细胞,进行纯化和培养.在此基础上,添加1×10-8mol/L的地塞米松, 连续加药3d,置入CO2孵箱中培养,同时作不加药的空白对照.通过倒置相差显微镜和电镜观察增殖和分化情况,检测上清液中的碱性磷酸酶和骨钙素含量,并且对成骨细胞的凋亡情况进行测定.结果胶原-胰蛋白酶消化法得到的成人成骨细胞,生长情况良好 ,生化指标稳定可靠,细胞纯化效果佳,可以满足相关研究的需要.进一步研究结果显示, 在地塞米松浓度为1×10-8mol/L,成骨细胞密度为10 000/ml的条件下,上清液中碱性磷酸酶和骨钙素含量明显增高,骨结节形成加速,与未加药的对照组比较差异均有非常显著性意义,同时成骨细胞的凋亡情况无明显变化.结论地塞米松对体外培养的成人成骨细胞的增殖和分化有明显的促进作用,可以作为促进骨形成的阳性对照应用于抗骨质疏松和筛选研究.