戊型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病,因其致病因子戊型肝炎病毒(HEV)的细胞培养一直不很成功,影响了戊肝研究的深入.学者们在这方面进行了大量研究,尝试了各种不同来源的细胞和不同的培养条件,积累了很多经验,其中一些细胞系已试试用于HEV的检测和疫苗的筛选.本文就HEV细胞培养方面的进展与应用作一介绍.
现代生物技术一般包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,细胞培养更具有特殊的作用和价值.有学者研究发现,由于永生化细胞在体内可多次传代,具有相对稳定的增殖特性和功能状态,将其作为细胞工程和组织工程等研究领域的标准细胞,促进了体外实验的标准化和科学化[1].费氏病毒学[2]指出,原代细胞的培养是直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,更有利于进行病原体感染的体内微环境、抗病毒药物筛选等研究,但是原代细胞只具有2～3次的复制繁殖传代周期,对开展细胞研究具有一定的局限.原代细胞永生化技术在未来的成功应用,不仅为生物制品的研究与开发提供了有力工具,而且也为难培养病毒的体外培养、疾病的诊断与治疗提出了新的思路[3].
病毒性肝炎是由肝炎病毒引起的,以损害肝脏为主的感染性疾病.可以分为甲型、乙型、丙型、丁型、戊型病毒性肝炎.在这五种病毒性肝炎中,甲型肝炎和戊型肝炎是通过肠胃道传播的,其他三种肝炎则可以通过血液和体液传播.其中丁型肝炎病毒是缺陷病毒,它自身不会引起疾病,必需有乙型肝炎病毒的辅助才能感染宿主.本文就乙型、丙型和丁型肝炎的病原体即乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,:HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C Virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis Delta Virus,HDV)体外细胞培养体系系统的研究现状作一简要综述.
戊型肝炎是一种严重危害人类健康的疾病,因其致病因子-戊型肝炎病毒(HEV)的细胞培养一直不很成功,影响了戊肝研究的深入.学者们在这方面进行了大量研究,尝试了各种不同来源的细胞和不同的培养条件,积累了很多经验,其中一些细胞系已试用于HEV的检测和疫苗的筛选.本文就HEV细胞培养方面的进展与应用作一介绍.
抗狂犬病疫莆在下列两种不同情况下使用:--保护处于狂犬病暴露危险的人群,即暴露前免疫;--暴露后预防发生临床狂犬病,通常在被疑似狂犬病动物咬伤后,即暴露后预防.暴露前后接种的疫苗是相同的,但按照不同的类型使用不同的免疫程序.狂犬病免疫球蛋白只用于暴露后预防.细胞培养或者胚胎卵起源的现代疫苗比由脑组织生产的老疫苗更安全和有效.目前在发展中国家大多数主要城市中心都能获得这些现代疫苗.狂犬病免疫球蛋白在全球供应紧张,甚至在许多狗狂犬病感染的国家主要大城市中心尚无法供应.
目的 观察在缺氧条件下前列腺上皮细胞体外培养细胞核膜表面雌雄激素受体表达的变化.方法 前列腺上皮细胞株RWPE-1体外培养,在缺氧或有氧培养环境中分别于接种后4、8、12、24、48 h检测其核膜雌雄激素受体基因和蛋白表达.基因表达采用RT-PCR法检测,蛋白表达采用免疫组化法检测.结果 缺氧条件下接种4h前列腺上皮细胞雄激素受体mRNA表达为(0.32±0.01),后随时间逐渐上升至48 h为(1.13±0.08),显著高于同期有氧条件下的(0.26±0.02,P=0.01)和(0.31±0.01,P=0.003)；免疫组化显示,缺氧条件下雄激素受体蛋白表达自12h开始较有氧条件下显著增加,分别为(42.08±1.58)/200个细胞和(26.37±6.76)/200个细胞(P=0.017).有氧条件下前列腺上皮细胞不论在基因还是蛋白水平雌激素受体几乎不表达；而缺氧条件下12 h可检测出雌激素mRNA表达为(0.15±0.01),至48 h升至(0.41±0.04),4h时雌激素阳性表达上皮细胞为(4.98±0.49 )/200个细胞,后逐渐升至48 h的(45.94±0.90 )/200个细胞.结论 缺氧可刺激前列腺上皮细胞核膜表面雌雄激素受体表达的上调.
目的 探讨体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)和平滑肌祖细胞(SPC)的方法,并初步比较不同培养条件下大鼠SPC对VSMC表型转化的影响.方法 原代培养细胞,通过蛋白印迹实验(Western Blot)检测平滑肌α-肌动蛋白(α-SMA)鉴定VSMC,SPC培养后经流式细胞术鉴定分选贴壁细胞CD14和CD105双阳性表达细胞继续培养为SPC,通过SPC与VSMC共培养以及利用Transwell装置条件培养、空白对照3种条件干预后,应用Western Blot法分别测定三组骨桥蛋白水平变化,以检测并初步比较不同条件下SPC对VSMC表型转化的影响.结果 两种细胞分别原代培养后,Western Blot鉴定VSMC,结果显示α-SMA表达呈阳性；鉴定SPC免疫细胞化学染色α-SMA表达呈阳性,且流式细胞仪分析显示CD14和CD105呈双阳性表达.与空白对照相比,两种细胞共同培养和条件培养时VSMC表达骨桥蛋白水平明显升高,共同培养较条件培养骨桥蛋白水平升高效果更为明显.结论 SPC对VSMC的表型由收缩型向合成型转变具有一定作用,SPC通过直接作用与旁分泌作用不同程度地增强了VSMC的表型转化；对比发现,两细胞直接接触培养时VSMC表型转化的影响更为明显(P＜0.05).
用含血清的常规培养基和无血清培养基(CHO-S-SFMⅡ)1:1(V/V)悬浮细胞,接种量为3×105/T/ml,在37℃,8%CO2培养箱中培养,使细胞密度达5×105个/ml,然后用等体积的CHOSFMⅡ将细胞稀释到3×105个/ml,继续培养,重复上述操作,直到血清浓度降为0.1%后,用完全无血清培养基培养至3×106个/ml,再以3×105个/ml接种,传50代,细胞增生活跃,状态良好,用MTT比色法测定重组人促红细胞生成素(rHuEPO)表达水平与常规含血清培养基相比,表达量未见明显差异.
综述了向培养基中添加代谢调节剂对红豆杉细胞培养生产紫杉醇产量影响调节方面的研究进展.着重介绍了诱导予的添加、前体饲喂和抑制剂的添加及调节剂的联合使用对红豆杉细胞生长及紫杉醇生产的影响.
目的观察米非司酮对子宫腺肌病灶组织细胞的作用. 方法采用噻唑兰法观察米非司酮对11例子宫腺肌病患者腺肌病灶组织原代培养细胞体外生长状态的影响,实验分为1.25、2.5、5.0 mg/L 3个药物浓度组,培养52 h,测定OD值,并与空白对照组对比. 结果 1.25、2.5、5.0 mg/L组及对照组的OD值分别为(0.219±0.044)、(0.185±0.038)、(0.152±0.033)、(0.262±0.068),5.0与1.25 mg/L组有显著差异(P<0.01),5.0、2.5 mg/L组与对照组有显著差异(P<0.01).细胞生长抑制率2.5 mg/L组(IR=29.4%)是1.25 mg/L组(IR=16.4%)的1.79倍,5.0 mg/L组(IR=42.0%)是2.5 mg/L组的1.43倍. 结论米非司酮能够抑制子宫腺肌病腺肌组织细胞的生长,其抑制能力与药物浓度呈正相关.
体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体.种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素.构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义.只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫.
人胚胎干细胞源自囊胚内细胞团(inner cell mass,ICM),能无限增殖并保持未分化状态(保持完整的、正常的染色体核型)的细胞.它可分化为来源于3个胚层的多种细胞.这种特性在世界范围内掀起了对人胚胎干细胞的研究热潮,并取得了飞速发展.本文就人胚胎干细胞建系及体外培养分化的研究进展作一综述.
目的简化人输卵管上皮细胞分离及培养方法,提高上皮细胞纯度.方法收集19例子宫肌瘤或子宫腺肌病等手术切除的输卵管进行上皮细胞体外培养.改良酶消化法和刮取法收集人输卵管上皮细胞,采用溶血法及差速贴壁法纯化上皮细胞.观察上皮细胞生长及特征,免疫组织化学检测其纯度,扫描和透射电镜评价细胞超微结构.结果改良法培养的人输卵管上皮细胞占细胞总数＞90%;电镜显示原代培养的细胞具有微绒毛及纤毛等上皮细胞特征,部分纤毛细胞的胞膜游离面有球状突起,细胞内可见含电子致密物或暗物质的囊泡.结论本改良法方法简单,培养的人输卵管上皮细胞纯度高,电镜结果有利于输卵管上皮细胞分化的研究.
地壳中含氟的化合物有100多种,占地壳含量的0.077%.我国除上海外,其余各省、市、自治区均有不同程度的氟中毒流行.同时在工业生产及生活燃煤产生的含氟烟尘和气体均可污染作业场所和大气.
目的 比较2,5-己二酮(2,5-HD)和3,3'-亚氨基二丙腈(3,3'-IDPN)对大鼠DRG神经元神经丝蛋白(NF-M)的损伤作用.方法 用出生后2 d的大鼠背根神经节(DRG)神经元,在培养皿中加不同浓度的2,5-HD和3,3'-IDPN进行培养,用荧光染料测定细胞毒性,计算细胞死亡率.用蛋白免疫荧光方法测定NF-M,计算DRG神经元细胞体的神经丝表达.结果 DRG神经元24 h接触2,5-HD和3,3'-IDPN的LD50约为32和102 mmol/L.DRG细胞体内的NF-M蛋白含量在接触2,5-HD(0、4、8和16 mmo/L浓度)24和48 h后结果显示,各个剂量组均有明显降低(P＜0.05.P＜0.01);而在接触3,3'-IDPN 24 h后,各个剂量组之间没有发生明显改变,但在接触48 h后,仅有64,128 mmol/L组与对照相比,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在DRG神经元具有相同死亡率时,2,5-HD和3,3'-IDPN 24 h后对NF-M蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05).结论 2,5-HD与3,3'-IDPN对NF-M的损伤不同.2,5-HD减少NF-M蛋白表达要早于细胞死亡.NF-M对2,5-HD比对3,3'-IDPN敏感.
目的探讨丹参注射液体外对肝星状细胞HSC-T6的毒性及其作用机制.方法利用细胞培养技术,苔盼蓝法检测系列丹参溶液对HSC-T6生长的影响,Gimsa染色观察细胞形态,MTT法检测丹参对细胞的生长抑制率,免疫组化检测血小板衍生生长因子(PDGF-BB)表达,生物法检测转化生长因子的表达.
胶质细胞是中枢神经系统内数量最大的一大类细胞,约占细胞总量的90%,而星形胶质细胞(astrocyte,AS)又是其中的主要组成部分.AS数量多,分布广,功能广泛,除了分泌神经元必需的营养因子,起到对神经元的支持营养作用外,还参与血脑屏障的组成,直接抵制外来物质对脑实质的损伤作用.
近20年来,人们对脑组织中星形胶质细胞的结构和功能有了更深入的了解.它在神经系统的正常生理活动、脑的发育和神经病理过程中都具有重要作用[1,2].对星形胶质细胞的体外研究表明,星形胶质细胞可合成铅特异结合蛋白,对铅有主动摄取和储存作用,被称为铅在脑组织中的储藏池[3].
目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RpMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响.方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24～48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1～7天培养液中LDH漏出量.结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P＜0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P＜0.01).结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备.
目的 以H2O2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型.方法 取新生大鼠海马神经细胞,培养至第5天,加入终浓度为50、100、150、200和250μmol/L的H2O2,培养12、24和48 h后,观察细胞形态,通过MTT法测定细胞存活率,CCK-8法测定细胞损伤率,LDH酶标法测定上清液LDH活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,确定出细胞损伤的最佳浓度时间.结果 H2O2可诱导神经细胞损伤且呈时间浓度依赖性.150 μmol/L H2O2作用24 h时,MTT法测得细胞存活率为(70.18±4.66)％;CCK-8法测得细胞损伤率为(28.30±6.72)％;LDH酶标法测得LDH活性为(208.81±12.24) U/L;流式细胞术测得细胞早期凋亡率为(11.53±2.53)％,晚期凋亡率及坏死率为(13.75±2.22)％.结论 150μmol/L的H2O2作用24 h,可成功构建海马神经细胞氧化损伤模型.
神经干细胞是神经科学进展最快的领域,为神经发育机制的阐明、神经系统疾病的临床治疗、药物及化学物的神经毒性评价提供了崭新的思路和方法学手段.目前,神经干细胞体外培养主要通过直接从神经组织分离培养、由胚胎干细胞等其它组织来源的干细胞诱导获得、永生化的神经干细胞3种方法,但不同实验室间的方法存在较大的差异.本文针对神经干细胞的体外分离培养方法研究进展和其在毒理学中的应用进行综述.
目的 观察金雀异黄酮(GS)对人成骨细胞增殖及分化的影响.方法 在加入受试物前4天,将本实验室所建立的第4代成人骨膜成骨细胞接种于无酚红高糖DMEM培养液中(含5%经活性炭-葡聚糖苷处理的胎牛血清),实验设溶剂对照、雌激素(E2)对照、抗雌激素它莫西芬(TAM)对照及三个GS剂量组,观察指标包括细胞DNA合成、细胞周期分布、细胞胶原蛋白的合成和碱性磷酸酶(AKP)活性的测定.结果 10-8mol/L E2、10-7mol/L GS和10-6mol/LGS对人成骨细胞处理48h,细胞DNA合成量明显增加,细胞增殖指数呈上升趋势,S期和M期细胞分布比例较溶剂对照组相明显提高,细胞胶原蛋白合成及细胞内碱性磷酸酶的活性增加;10-7mol/L TAM可结抗GS及E2对细胞所产生的这些生物学效应.结论 GS可促进人成骨细胞增殖及细胞合成和分泌胶原蛋白,并提高成骨细胞AKP活性,这些结果 提示,在雌激素缺乏的条件下,GS对成骨细胞来说具有雌激素效应,可刺激成骨细胞的增殖及分化作用.由于这些效应可被雌激素受体拮抗剂TAM所抑制,故GS的促进骨形成作用可能是通过影响雌激素受体途径而发挥作用的.
应用MTT法、克隆形成实验、3H-TdR掺入实验测定了麦胚黄酮类提取物对人乳腺髓样癌细胞株BCap-37的生长抑制作用,结果显示麦胚黄酮类提取物能明显抑制人乳腺髓样癌细胞株BCap-37的生长、克隆形成和DNA合成能力,均呈现明显的剂量-效应关系,并随作用时间延长其效果增强;因此麦胚黄酮类提取物可能是通过抑制了BCap-37细胞DNA的合成而降低其生长和繁殖的能力.
患者男性，49岁，教师。因发热、干咳、右侧胸痛伴腹泻二周，外院胸片示右中肺尖，痰细胞培养三次均为卡他布兰汉氏菌。注青霉素、先锋霉素V、泰星等静滴十余天无效而转入本院。既往有吸烟史600支/年，慢性咳嗽史十余年。余无其它慢性病史。
为了探讨早期自然流产与胎儿染色体异常的关系,本院经过长时间的探索发现绒毛细胞长期培养法和染色体制备方法简单,并且能获得足够分析的中期染色体.本文采用上述方法对早期流产患者进行绒毛细胞遗传学分析,报告如下.1 资料与方法1.1资料选择2009年1月～2011年12月因胚胎停止发育及阴道流血于本院妇科门诊就诊病例1012例.
目的:探索简捷细胞培养方法并观察该方法对癌细胞特性的影响.方法:将复苏的OC-3-VGH卵巢癌细胞株不经洗涤直接移至细胞培养瓶,加入10ml RPMI-1640培养液,放入培养箱,余同传统方法,观察细胞生长情况;取细胞悬液,以细胞数4×106/ml,0.2ml/只接种至BALB/c雌性裸小鼠皮下,2个月后处死,取肿瘤组织制片,并与传统培养方法结果进行比较.结果:两种方法培养的细胞均生长活跃,皮下接种7d左右,裸鼠长出肿瘤,组织学检查未见明显差异.结论:改良细胞培养方法减少了传统方法的繁琐步骤,方便细胞培养.
目的:探讨孕期沙眼衣原体、支原体感染的妊娠结局和母婴传播途径.方法:采用沙眼衣原体、支原体属单克隆抗体免疫荧光法检测孕妇感染情况,观察孕期单项感染、混合感染及未感染者产时并发症、早产及胎儿异常,新生儿等情况.并在产时对孕期感染者的羊水、胎膜、胎盘、脐血、新生儿、死婴,应用McCoy传代细胞法和双相一步法,进行沙眼衣原体、解脲脲原体细胞培养,并将胎盘进行病理检测.结果:孕期感染与早破水、胎儿窘迫、胎盘残留、新生儿窒息无关;衣原体感染与胎膜残留有关(P＜0.05);混合感染增加了胎儿异常、产后出血率(P＜0.005);单项感染和混合感染均增加胎儿异常、早产、IUGR发生率(P＜0.01).细胞培养于胎盘、胎膜、脐血、羊水及死胎、活婴口腔、体液中找到衣原体和解脲脲原体.通过病理检测证实感染可造成胎盘功能不全.结论:孕期沙眼衣原体、支原体感染,可致病原菌上行,不同程度地感染胎盘、脐血、胎膜,污染羊水,致胎儿不良后果.
胚胎干细胞体外生长的环境要求极为苛刻,原则上应满足两个条件:(1)促进细胞的分裂增殖;(2)抑制细胞的分化.不同动物胚胎在体内发育有不同特点,对体外生长的环境要求不同,针对不同动物,应采取相应的策略,才能建立起真正的胚胎干细胞系.
目的:探讨人乳头瘤病毒感染Hofbauer细胞机制.方法:联合法、SP法分离鉴定人绒毛Hofbauer细胞,ELISA法检测培养液上清液中HBVM,PCR法检测Hofbauer细胞及培养上清液中HBV-DNA.结果:使用联合法可获取高活度、高纯度的Hofbauer细胞;人乳头瘤病毒感染血清可在无辅剂下直接依附Hofbauer细胞表面,并可侵入细胞内进行复制表达.结论:人乳头瘤病毒感染血清可直接感染Hofbauer细胞.
目的:建立人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂成骨分化潜能.方法:用酶消化法、传统组织块法和改良组织块法从人脐带中分离间充质干细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;用不同的培养体系诱导hUCMSCs向成骨细胞及成脂细胞分化,并对其进行鉴定.结果:改良的hUCMSCs培养方法培养细胞纯度更高,在相同的培养时间内,改良组织块法所获得的细胞数量是酶消化法的2-3倍,是传统组织块法的20～30倍,细胞呈长梭形生长;高表达CD73、CD90、CD44、CD105,不表达CD31、CD45、CD34;茜素红染色及油红O染色证实了hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞.结论:建立了hUCMSCs的培养新方法,证实了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潜能,为其治疗应用提供支持.
