γ-突触核蛋白基因(γ-synuclein,SNCG),又称乳腺癌特异性基因1(breast cancer specific gene 1,BCSG 1),由Ji等[1]于1997年发现,与已知的α-和β-突触核蛋白同属突触核蛋白基因家族.对突触核蛋白家族的研究一直是神经变性疾病领域的热点,它的表达异常影响多巴胺能神经元功能,导致阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性疾病的发生和发展[2-3].近期研究发现突触核蛋白家族与肿瘤遗传学相关,尤其是其中最后发现的SNCG与多种器官恶性肿瘤的发生和进展有关[4].在乳腺癌中,SNCG可能与肿瘤发生、进展、转移以及化疗耐药关系密切.
以往研究[1-6]显示,在乳癌细胞的生长、浸润、转移过程中,乳癌特异基因1 (breast cancer specific gene-1,BCSG1)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)均起到一定的作用.作者对乳腺纤维腺瘤、浸润性导管癌旁乳腺组织、无腋窝淋巴结转移浸润性导管癌和伴腋窝淋巴结转移浸润性导管癌组织中BCSG1、MMP-2、TIMP-2、VEGF蛋白的表达进行了检测,分析其表达特征,为判断乳癌恶性进程和评估预后提供依据.
目的:构建乳腺癌特异性基因(BCSG1) RNAi重组质粒,并检测其在三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-321中对BCSG1基因表达的干扰效果和对细胞增殖的影响.方法:将两组干扰片段BCSG1-R1、BCSG1-R2及阴性对照片段BCSG1-C分别克隆入pGenesil-1穿梭质粒,经酶切鉴定及测序后,将测序正确的克隆转染入大肠杆菌DH5α中进行扩增Real-time PCR检测重组质粒转染MDA-MB-321细胞后,各组细胞内BCSG1-mRNA表达水平,Transwell细胞侵袭实验检测重组质粒对MDA-MB-321细胞侵袭能力的影响.结果:成功将干扰片段和阴性对照片段克隆入pGenesil-1质粒,构建出pGenesil-1 -BCSG1-R1、pGenesil-1-BCSG1-R2和pGenesil-1-BCSG1-C重组质粒.与对照组相比,BCSG1-R1和BCSG1-R2组的BCSG1-mRNA表达水平明显下调(P＜0.05);干扰后,MDA-MB-321细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05).结论:成功构建BCSG1-RNAi重组质粒,可有效下调三阴乳腺癌细胞株MDA-MB-321内BCSG1的表达及细胞的侵袭能力.
