抗体药物是近年来复合增长率最快的一类生物技术药物,占现有生物技术药物研发总数的30%～35%.截至2006年,美国FDA已批准35个抗体药物,其中治疗肿瘤抗体药物占32%,免疫性疾病37%,器官移植11%,感染性疾病8%,心血管疾病4%,其他8%;按照抗体类型分析,鼠源20%(其中约70%用于肿瘤的治疗),人源化60%,全人抗体20%.在肿瘤治疗方面,应用利妥昔单抗(Rituxanab,美罗华)治疗B细胞性非霍奇金淋巴瘤已达30多万例病人,单药治疗总有效率为50%,其疗效与化学药物相同,但更安全,几乎无副作用,抗体联合化疗有效率高达80%以上.
目的 通过杆状病毒昆虫细胞系统重组表达抗β淀粉样肽40人单克隆抗体,为全人抗体治疗阿尔茨海默病创造条件.方法 将抗β淀粉样肽40人单链抗体重链可变区和轻链可变区分别克隆插入pAC-L-CH3的多克隆位点,构建成pAC-VH-VL表达质粒.将表达质粒和BaculoGold共转染SF9细胞后,用免疫荧光方法进行人IgG表达的检测.将感染重组杆状病毒的昆虫细胞培养液上清过蛋白A-琼脂糖亲和层析柱,洗脱纯化出的抗体经过SDS-PAGE电泳鉴定纯化蛋白质.结果 杆状病毒昆虫细胞系统抗β淀粉样肽40人单克隆抗体表达质粒pAC-VH-VL构建成功.将表达质粒和辅助病毒感染昆虫细胞后可见昆虫细胞表达人抗体.经过蛋白A-琼脂糖亲和层析,从昆虫细胞培养基中纯化出抗β淀粉样肽40人单克隆抗体.结论 通过基因工程手段在人抗Aβ40抗体可变区羧基端连接人抗体恒定区片段,通过杆状病毒昆虫系统分泌表达并纯化获得完整的人抗Aβ40单克隆抗体.
目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE-A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin-A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用.方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ-AbrinA相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A表达质粒转化E.coli TOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达.表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用.结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60 kD;纯化的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml.结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin-A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用.
