目的:构建及表达全人源抗肝癌MAGE-A1单链抗体(A3)与相思子毒素A链(Abrin-A)的原核表达载体,并检测其对人BEL7402肝癌细胞系的杀伤作用.方法:应用PCR方法体外扩增A3基因,经测序后重组入原核表达载体pBAD/gⅢ-AbrinA相应位点上,将构建正确的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A表达质粒转化E.coli TOP10,左旋阿拉伯糖诱导表达.表达产物经蛋白纯化及活性鉴定,采用MTT法检测其对BEL7402细胞的体外杀伤作用.结果:构建的重组免疫毒素表达载体pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约60 kD;纯化的pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A对BEL7402细胞的最大杀伤率为70.17%,IC50为3.12μg/ml.结论:构建、表达的全人源抗肝癌A3/Abrin-A融合免疫毒素对肝癌细胞有较明显的杀伤作用.
