探讨含非甲基化CpG单核苷酸(CpG-ODN)协同Calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染的保护性作用、诱导的免疫应答类型及其免疫机理.Calpain基因从原核表达载体PGEX-2TK亚克隆到含小鼠IL-2基因启动序列的真核表达载体pVAC,构建含日本血吸虫疫苗候选分子Calpain基因的真核表达体系pVAC-calpain的DNA疫苗,构建的DNA疫苗与CpG ODN免疫BALB/c小鼠,在不同阶段采血测定免疫鼠抗体的动态变化、RT-PCR分析免疫鼠细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-12的表达,加强免疫一周后用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫鼠,用减虫率、减卵率及其病理组织学指标考核保护性免疫的效果.pVAC-calpain的DNA疫苗体系诱导了IgG抗体的产生,免疫3周后细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-12的表达表现出差异.特别是在CpG-ODN和pVAC-calpain免疫组IFN-γ,IL-12有高度表达,而IL-4的表达受到相对抑制,对攻击感染的日本血吸虫表现出了45%的减虫效果,虫卵肉芽肿的面积显著性的减少.CpG ODN协同日本血吸虫Calpain DNA疫苗诱导了Th1为主的免疫应答,并能部分抵抗日本血吸虫感染和减轻感染鼠由于Th2免疫应答所导致的虫卵肉芽肿反应,提示CpG ODN能够协同Calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染和缓解日本血吸虫免疫病理反应.
巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris,Pp)表达体系是近年来刚发展起来的真核表达体系,其操作技术和酿酒酵母非常相似,相比而言Pp表达体系的应用还不够广泛,但这一体系已经显示出很好的优势和应用前景,已经成为目前分子生物学领域中用于表达重组蛋白的标准工具之一,广泛用于基因重组药物的表达.本文就采用这一表达体系表达外源蛋白所应考虑的因素进行综述.
