目的 建立一种灵敏的定量检测人外周血单个核细胞(PBMC)细胞浆和细胞核内糖皮质激素受体α同型(GRα)的生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验(ABS-ELISA)方法.方法 分别提取人PBMC细胞浆和细胞核总蛋白,用GRα纯品或总蛋白浓度相等的细胞提取液包被酶标板,加入针对GRα的特异性兔抗人多克隆抗体(一抗)和山羊抗兔IgG(二抗),应用生物素-亲和素系统(ABS)进行放大,采用多因素棋盘滴定方法确定最佳实验条件,用GRα纯品建立ELISA标准曲线,定量检测GRα的含量.结果 该研究确定应用0.1 mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)包被GRα纯品或细胞提取液,一抗浓度500 ng/100 μL,二抗浓度400 ng/100 μL,使用ABS放大系统,以TMB作为辣根过氧化物酶(HRP)的底物,于450 nm处检测吸光度值.该ABS-ELISA方法灵敏度为1 μg/L,工作浓度范围1～100 μg/L,批内变异系数(CV)为5.0%～6.9%,批间CV为7.1%～9.6%,不同操作者批内和批间的CV分别为4.7%和6.2%,均在实验允许范围内,可重复性良好.另外,该法无明显交叉反应,有一定特异性.结论 该研究建立了一种特异性高、可重复性好、敏感、快速、简便的定量测定PBMC细胞浆和细胞核内GRα的新方法,对进一步探讨自身免疫病的激素疗效与患者GR的关系等方面具重要价值.
由于自身免疫病激素耐受问题的热点主要集中在糖皮质激素受体研究方面,此文就糖皮质激素受体同型的特点、亚细胞分布、两种同型的相互作用机制及其与激素敏感性的关系等进行了系统综述.
目的:观察不稳定型心绞痛(UAP)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后早期并发症的发生情况,检测术前同型半胱氨酸(Hcy)水平及PCI前、术后vWF、白细胞介素-8(IL-8)、一氧化碳(NO)水平,探讨Hcy与PCI早期并发症的关系及可能的作用机制.方法:选择88例行PCI UAP患者,分别于术前、术后30 min、4 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d取外周静脉血,采用酶联免疫吸附双抗夹心法测定Hcy、vWF、IL-8,利用硝酸还原酶法测定NO.结果:88例患者PCI术后心脏早期并发症总发生率为12.5%.早期并发症组患者术前Hcy、vWF和IL-8水平显著高于非早期并发症组(均P<0.05),NO水平显著低于非早期并发症组(P<0.05).早期并发症组患者术后vWF和IL-8峰值水平显著高于无早期并发症组(均P<0.05),术后NO最低值低于非早期并发症组,但两者相比差异无统计学意义(P＞0.05).Hcy水平与vWF、 IL-8术前、术后峰值水平呈正相关(r=0.634,P＜0.01;r=0.534,P＜0.01;r=0.597,P＜0.01;r=0.544,P＜0.01),与NO术前、术后低值水平呈负相关(r=-0.568,P＜0.01、r=-0.148,P＞0.05).多变量Logistic回归分析,术前Hcy水平(RR=1.225,CI=1.059-1.418,P＜0.01),糖尿病(RR=1.712,CI=1.128-2.898,P＜0.05)是PCI早期并发症的独立预测因子.结论:①Hcy水平与PCI术后早期并发症密切相关,随着Hcy水平升高,早期并发症有显著增高趋势.②血浆Hcy可能通过影响IL-8、vWF水平导致早期并发症的出现.③Hcy水平对PCI术后早期并发症具有独立预测价值.
目的:探讨同型半胱氨酸(HC)是否诱导人外周血单核细胞(Mn)表达组织因子(TF),并且观察叶酸对其作用的影响.方法:将Mn暴露于不同浓度HC、叶酸一定时间后,采用RT-PCR、流式细胞术和Western Blot检测其TF表达.结果:HC可以诱导Mn表达TF,并且呈时间和剂量依赖性,而且这种诱导作用不能被叶酸抑制.结论:HC可以诱导Mn表达TF,从而在血栓形成中起重要作用.
1 对象与方法冠心病组选择本院经冠状动脉造影证实的住院冠心病患者57例,均不伴其它严重心、肝、肾、肺、脑及糖尿病,其中男32例,女25例,年龄61～76岁(平均67.9岁);包括稳定性心绞痛17例,不稳定性心绞痛25例和急性心肌梗死15例.健康对照组选择排除心血管系统、消化系统及营养不良的健康志愿者40例,其中男23例,女17例,年龄60～78岁(平均65.8岁).所有受检对象于清晨空腹抽取静脉血,分别加入相应试剂,分离出血浆及血清,血浆同型半胱氨酸(Hcy)测定采用高效液相色谱法,血浆内皮素(ET)测定采用放射免疫法,血清一氧化氮(NO)测定采用亚硝酸盐还原法,同时测定血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平.采用t检验及单因素分析,P<0.05表示差异有统计学意义.
目的:近年来,因ABO同型交叉配血不合的病例在临床输血工作中时有发生,稍有不慎便有可能带来灾难性的后果.作者通过自身所遇到的病例并结合相关文献资料,对引起ABO同型交叉配血不合的原因进行分析并提出解决方案.方法:使用凝聚胺配血法和卡式配血法.结果:在对1例临床病人常规合血过程中,经凝聚胺和卡式配血法进行严格操作,出现主侧凝集,配血不合.病历显示病人有反复输血史,通过不完全抗体检测,发现病人血清中有抗-E产生,通过调换同型血液后配血成功.结论:多次输血可产生不完全抗体,引起输血不合,遇有ABO同型交叉不合病例,应首先检查血型是否正确,有无输血史,利用筛查试剂检查不完全抗体,有条件的实验室应将预约病人的不完全抗体筛查列入常规工作,提前为将要输血的病人作好准备,避免在合血过程中发现问题后再找原因而浪费时间.如自身无法作详细的血型检查的,应及时将标本送血液中心请求帮助.
