目的 建立锌转运体8自身抗体(ZnT8A)的放射配体检测法(RLA). 方法 采用重组人ZnT8质粒,经试管内转录与翻译,获得35S- ZnT8抗原,35S-ZnT8与血清在自制旋转孵育器上旋转温育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物.免疫复合物经TBST缓冲液洗涤后,用多功能闪烁发光分析仪检测沉淀物放射性计数值.参加国际糖尿病免疫学会(IDS)和美国疾病预防控制中心联合举办的第六次糖尿病自身抗体国际标准化评估(DASP 2009),评价该方法的敏感性和特异性.检测429例1型、855例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步评价其临床应用价值. 结果 该方法批内CV 3.9%～9.8%,批间CV4.3%～13.8%; DASP 2009显示,该方法敏感性66%,特异性100%.受试者操作特性曲线(ROC)分析显示,曲线下面积为0.879±0.034;该方法阳性阈值ZnT8A指数为0.011(405名正常人的99%百分位点),检测1型糖尿病患者阳性率24.0%,高于初诊2型糖尿病患者1.3%和健康人0.99%(P均＜0.01). 结论 建立的RLA法检测ZnT8A敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于自身免疫糖尿病的诊断与分型.

目的 建立SOX13抗体的放射配体检测法,初步探讨其对自身免疫糖尿病的诊断价值.方法 采用SOX13质粒,经体外转录与翻译,获得35S标记SOX13.35S-SOX13与血清在旋转孵育器中混匀过夜,用蛋白A琼脂糖沉淀抗原抗体复合物.沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后,置液体闪烁计数仪上计数,结果以国际标准化的抗体指数表示.检测162例急性起病、328例隐匿起病糖尿病患者以及120例正常人血清中SOX13抗体指数.结果 (1)方法的批内CV 3.9%～9.2%,批间CV 5.2%～12.0%,28例标本重复检测3次,结果判断一致;(2)120例正常人的SOX13抗体指数呈偏态分布,取97.5%的百分位点,阳性阈值为0.10;(3)检测急性起病患者162例,阳性15例,阳性率9.3%;隐匿起病患者328例,阳性34例,阳性率10.4%,均显著高于正常组(P＜0.05).结论 (1)建立的SOX13抗体放射配体检测法灵敏度和重复性好,可应用于临床;(2)SOX13抗体对自身免疫性糖尿病(特别是GAD-Ab、IA-2Ab、CPH-Ab阴性者)具有独特的诊断价值.

目的对谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA)检测条件进行优化分析,使之更好地在临床上推广应用.方法采用我所自建的放射配体检测法,对抗原抗体的孵育方式与时间、缓冲液pH值与洗涤次数、以及离心机类型选择进行优化分析,并通过参加国际糖尿病免疫学会(IDS)第3次糖尿病自身抗体标准化检测方法评估(DASP 2003),以及与国内商品化放射免疫试剂盒比较,评价优化后方法的灵敏度与特异性.结果优化后的检测条件为:采用缓慢旋转孵育的方式使GAD-Ab、IA-2A抗原与血清孵育24h,IAA孵育72h,采用pH 7.2～7.4的TBST缓冲液对GAD-Ab 、IA-2A沉淀复合物洗涤4次,对IAA沉淀复合物洗涤5次,以及采用水平转头低温离心机;DASP 2003结果回报显示,检测条件优化后GAD-Ab灵敏度82%,特异性98%.IA-2A灵敏度64%,特异性100%.82例IAA指数呈梯度排列的标本检测结果与国内放射免疫试剂盒一致率89%,指数＜0.04或＞1.00的标本两方法检测一致率100%,不符合的标本均为优化后方法检测为低滴度阳性(指数在0.04～1.00)而试剂盒检测阴性.结论优化后的胰岛自身抗体放射配体检测法灵敏度和特异性好,可在临床广泛应用.