在肿瘤研究中,应用流式细胞仪技术分析肿瘤细胞的DNA含量及周期细胞群体数目,已成为肿瘤临床诊断、疗效评价及预后推测的重要参考依据[1,2].DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,在激发光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测并分析这些荧光强度,从而了解细胞群体中各周期的分布状况,即G0/G1期、S期、G2/M细胞所占的百分比例.
在生物学研究中,利用细胞内DNA双螺旋结构碱基对与某些核酸荧光染料有良好的亲和力,荧光染料在光的激发下,产生特定的荧光,运用流式细胞仪检测、分析其荧光强度(Mean值),及其变异系数(CV值),了解细胞内DNA含量,已成为科学分析细胞DNA含量及其所处周期状态的一种手段[1,2].然而,流式细胞仪对操作者技术要求高,同一样本不同实验室检测的结果不尽相同;即使是同一实验室,不同操作人员检测结果亦不一样.其原因既有各实验室评价指标的差异[2-4],也有操作人员个人习惯以及机器本身性能的差异,选定技术参数不同等等.本研究旨在探讨流式细胞仪每秒进样细胞数对检定细胞G0/G1期峰Mean值及CV值的影响,以寻求合适的每秒进样细胞数.
目的 探讨4种核酸染料(EB、SYBR Green Ⅰ、Gold View和AO)在单细胞凝胶电泳(SCGE)中的染色特性,以分析用新型核酸荧光染料代替EB染料的可能性.方法 分离提取健康人外周血淋巴细胞,分别用0、20、40、60、80 μg/mL的H2O2进行处理,中性SCGE检测淋巴细胞DNA损伤情况;分别用EB、SYBR Green Ⅰ、Gold View和AO进行染色,荧光显微镜下观察并比较染色结果.分析尾部DNA百分含量(％Tail DNA)以比较组间差异.结果 SCGE结果表明,SYBR Green Ⅰ、Gold View和AO均能很好的反应实验结果,不同浓度中,1×～5×SYBR Green Ⅰ、2×～5 ×Gold View、2～5 μg/mL AO为最佳染色浓度范围.EB、SYBRGreen Ⅰ、Gold View和AO的回归系数分别为2.71、2.81、2.73、2.75,其染色效果较为一致,稳定性分析结果表明,3组细胞在48 h以内结果稳定,％ Tail DNA差异无统计学意义(P均＞0.05);SYBR Green Ⅰ、Gold View和AO实验室内精密度分别为6.92％、7.10％、8.25％,优于EB染色(8.35％);SYBR Green Ⅰ和Gold View重复性分别为3.07％、2.74％,优于EB染色(3.59％).结论 SYBR Green Ⅰ、Gold View和AO均可用于本实验染色,Gold View是更适合用于SCGE中替代EB的核酸荧光染料.
目的应用新型核酸荧光染料Sybr-Green I检测端粒酶活性,并探讨该酶活性在结直肠癌临床诊断中的意义.方法用端粒重复扩增(TRAP)结合Sybr-Green I技术检测46例结直肠癌及19例癌旁组织中端粒酶的活性.结果 Sybr-Green I能清晰显示端粒酶扩增后的条带.端粒酶活性在结直肠癌中阳性率为89.13%,在癌旁组织中未发现端粒酶活性.端粒酶活性与细胞分化程度、Dukes分期、有无淋巴结转移均无关.结论用Sybr-Green I检测端粒酶活性对于诊断结直肠癌具有重要的临床辅助价值.
