本研究的目的是观察经醛脱氢酶基因(ALDH1)转导的造血细胞对环磷酰胺的耐受性.以逆转录病毒载体pLXSN-ALDH1将醛脱氢酶基因导入人造血细胞系K562,应用PCR证实原病毒的整合,用RT-PCR检测ALDH1基因表达和用MTT法分析ALDH1过表达导致的4-氢过氧环磷酰胺的耐药表型.结果发现,逆转录病毒成功地介导了醛脱氢酶基因转移,全长ALDH1 cDNA以原病毒形式整合入受体K562细胞基因组,RT-PCR检测到ALDH1基因转录表达.ALDH1过表达的基因转移细胞对环磷酰胺的耐受性明显提高(4倍),IC50≈10 μmol/L.结论提示,体外ALDHl过表达足以引起对环磷酰胺耐受,为体内ALDH1基因转移以保护骨髓细胞免受环磷酰胺的毒性作用提供了实验依据.

目的:研究甲氨蝶呤(MTX)联合4-氢过氧环磷酰胺(4HC)对体外培养的干燥综合征(SS)患者外周血单个核细胞(PBMC)的周期、凋亡及分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:MTX、4HC、MTX联合4HC的3组药物在4个浓度水平0、1、10、100μg/ml,与体外培养的SS患者PBMC作用48 h.用流式细胞术(FCM)检测细胞周期、凋亡,用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测IL-1β、TNF-α分泌水平.对MTX、4HC在0、1、10μg/ml浓度水平进行析因设计.结果:细胞周期:与对照组相比,MTX100组、MTX100组PBMC的G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例减少;不同药物浓度4HC组对细胞各周期影响多数无统计学意义;联合组中MTX1+4HC1组、MTX10+4HC10组及MTX100+4HC100组G0/G1期细胞比例减少,S期及G2/M期比例增加.细胞凋亡:MTX10组、MTX100组、4HC10组、4HC100组和联合组PBMC凋亡率高于对照组.同一药物浓度水平时,MTX1+4HC1组凋亡率高于MTX1组,MTX10+4HC10组凋亡率高于MTX10组及4HC10组,MTX100+4HC100组凋亡率高于MTX100组及4HC100组.细胞因子:不同药物浓度的MTX组、4HC组和联合组IL-1β分泌水平均低于对照组;除MTX10外,各药物组TNF-α分泌水平均低于对照组.比较同一药物浓度水平时,不同组的IL-1β、TNF-α分泌水平,混合组均低于单用药组.交互作用:MTX联合4HC在0、1、10μg/ml 3个浓度对G0/G1期比例、凋亡率、IL-1β及TNF-α分泌水平4个方面的,值分别为:4.68、45.19、4.44及3.392,P值均<0.05,提示MTX和4HC存在交互作用.结论:MTX和4HC联合作用具有协同效应.MTX和4HC联合作用于体外培养的SS患者的PBMC,可有效抑制其G0/G1期的细胞凋亡,降低促炎因子IL-1β、TNF-α的分泌水平.