本研究的目的是观察经醛脱氢酶基因(ALDH1)转导的造血细胞对环磷酰胺的耐受性.以逆转录病毒载体pLXSN-ALDH1将醛脱氢酶基因导入人造血细胞系K562,应用PCR证实原病毒的整合,用RT-PCR检测ALDH1基因表达和用MTT法分析ALDH1过表达导致的4-氢过氧环磷酰胺的耐药表型.结果发现,逆转录病毒成功地介导了醛脱氢酶基因转移,全长ALDH1 cDNA以原病毒形式整合入受体K562细胞基因组,RT-PCR检测到ALDH1基因转录表达.ALDH1过表达的基因转移细胞对环磷酰胺的耐受性明显提高(4倍),IC50≈10 μmol/L.结论提示,体外ALDHl过表达足以引起对环磷酰胺耐受,为体内ALDH1基因转移以保护骨髓细胞免受环磷酰胺的毒性作用提供了实验依据.
醛脱氢酶基因(ALDH1)能氧化环磷酰胺 (CTX)的中间代谢产物醛磷酰胺,形成无毒的羧基磷酰胺,发挥对CTX的解毒作用.我们利用逆转录病毒介导ALDH1转染人造血细胞系K562,体外实验观察ALDH1基因转移过表达与CTX耐受程度间的关系.
3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)是疟原虫糖酵解过程中重要的酶,其基因最近被发现[1].本文报告恶性疟原虫FCCI/HN株GAPDH基因序列测定结果.
背景与目的:将不同类型的耐药基因同时导入造血细胞,以扩大耐药范围和进行体内选择是基因治疗的重要策略,这类载体基因片段较长,进行基因转移有一定的难度.本研究旨在寻找安全有效的长片段基因转移途径.方法:将携带不同类型的耐药基因醛脱氢酶基因(ALDH1)和多药耐药基因(MDR1)的逆转录病毒载体G1Na-AIM以NdeI酶切线性化,电穿孔法转导PA317细胞,经长春新碱(VCR)和4-氢过氧化环磷酰胺(4-HC)选择后,应用Southern blot法确定原病毒的整合,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)分析转移基因的表达,筑巢式聚合酶链反应(nested PCR)检验转移系统的安全性.结果:电穿孔法有效介导了ALDH1与MDR1基因的同时转移,Southern blot法证实ALDH1与MDR1基因稳定整合至宿主细胞基因组,RT-PCR检测到转移基因的转录,FCM测定下游基因MDR1蛋白表达增高4倍,转导率达98%.nested PCR未检测到辅助病毒(env).结论:电穿孔法安全有效地介导了ALDH1与MDR1基因的共转移和高表达.
