利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建了能同时表达IL-5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123A11β75IL5.Southern-blot证实,痘苗病毒C-K片段间基因缺失的同时伴有IL-5基因的插入.鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123A11β75)增加约2倍,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAg IgG抗体分泌细胞(ASC)数与对照组无差别.可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体,与对照组相比,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高,而IgG则无差异.本实验说明:IL-5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应.提示非复制载体疫苗中,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径.

构建了表达GM-CSF的非复制型重组痘苗病毒RVA11β75GMCSF.Southern blot证实重组病毒C-K片段间基因缺失,同时插入GM-CSF基因,GM-CSF可以分泌形式良好表达.Wistar大鼠Walkers瘤内注射重组病毒RVA11β75GMCSF后,可以延长荷瘤鼠的生存时间;重组病毒RVA11p65GMCSF修饰的肿瘤细胞裂解物(WRC256)的肿瘤免疫治疗,可以抑制荷瘤大鼠的肿瘤生长,瘤重较对照组减轻.此结果提示:非复制重组痘苗病毒表达的GM-CSF可作为有效的肿瘤免疫治疗佐剂.

从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)Bostwana C亚型全基因的质粒pJM4-HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southern blot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Western blot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中.NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep-IFN-'γ-Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN-'γ的C+8 T细胞(占脾细胞总数0.20%);经乳酸脱氮酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞.这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础.