目的 建立阪崎肠杆菌的TaqMan PCR检测方法.方法 将阪崎肠杆菌的菌悬液连续10倍稀释后与健康人新鲜粪便混匀,制备成1.2×10(0)～1.2×10(8) cfu/ml梯度浓度的粪便模拟标本并提取DNA,用以评价阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的灵敏度、特异性和稳定性.结果 实时荧光TaqMan PCR法对阪崎肠杆菌粪便模拟标本的检测灵敏度为1.2×10(3) cfu/nd;其线性检测范围为:1.2×10(3)～1.2×10(8) cfu/ml;在稳定性评价中,对含菌量为1.2×10(8)、1.2×10(6)和1.2×10(4) cfu/ml的粪便模拟标本进行实时荧光TaqMan PCR法重复检测10次,结果显示扩增反应Ct值的变异系数(CV)为0.65%～1.47%;在特异性评价中,除了阳性对照其余样本均未见特异性扩增曲线.结论 本研究建立了阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法.

目的 建立针对类志贺邻单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系.方法 根据类志贺邻单胞菌23S rRNA基因的一段特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度；用30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性.结果 实时荧光TaqMan PCR快速检测体系对类志贺邻单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系；对类志贺邻单胞菌基因组的检测灵敏度为3 × 10-2pg/反应体系；该检测体系在检测30种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增,整个反应在2h内完成.结论 本研究建立的实时荧光TaqMan PCR 检测体系可作为类志贺邻单胞菌灵敏、特异、快速的检测方法.

目的 建立针对嗜水气单胞菌的高灵敏、高特异的实时荧光三重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系.方法 根据嗜水气单胞菌的16S rDNA、气溶素基因(aerA)和丝氨酸蛋白酶基因(ahp)的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高通量实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用29种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性.结果 实时荧光三重TaqMan PCR快速检测体系对嗜水气单胞菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系;对嗜水气单胞菌基因组的检测灵敏度为5×10-2 pg/反应体系;该体系的特异性引物探针在检测29种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现假阳性,整个反应在2 h内完成.结论 本研究建立的实时荧光三重TaqMan PCR检测体系可作为嗜水气单胞菌灵敏、特异、快速的检测方法,并同时评价嗜水气单胞菌的致病潜力.

目的 建立针对阪崎肠杆菌的高灵敏、高特异的实时荧光双重TaqMan聚合酶链式反应(PCR)快速检测体系.方法 根据阪崎肠杆菌基因组16S rRNA～23S rRNA的内部转录间隔区(ITS)基因和外膜蛋白A(OmpA)基因的特异性序列设计引物及TaqMan探针,利用高通量实时荧光PCR检测平台探讨该检测体系的灵敏度;用50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌评价该检测体系的特异性.结果 实时荧光双重TaqMan PCR快速检测体系对阪崎肠杆菌重组质粒的检测灵敏度为1×102拷贝/反应体系；对阪崎肠杆菌基因组的检测灵敏度为4×10-1 pg/反应体系;该检测体系在检测50种其他肠道致病菌及院内感染中常见的致病菌时未出现特异性扩增,整个反应在2h内完成.结论 本研究建立的实时荧光双重TaqMan PCR检测体系可作为阪崎肠杆菌灵敏、特异、快速的检测方法,并同时检测阪崎肠杆菌的致病力.