目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病(DN)骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)肾组织miRNA-181a及GRP78表达的影响.方法:8周龄MKR鼠,按性别、空腹血糖、体质量随机分为空白组,模型组(高脂喂养联合单侧肾切除),左归降糖益肾方组,阳性药物组(格列喹酮片0.0039g/kg+盐酸贝那普利片0.0013g/kg),4-苯基丁酸组(1.44g/kg),每组15只;同龄C57鼠10只作为正常组.造模后8周灌胃给药,左归降糖益肾方28.8g/kg灌胃治疗8周.留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠.电化学法检测空腹血糖,酶联免疫吸附法(EHSA)检测尿微量白蛋白含量;荧光PCR检测肾组织miRNA-181a表达水平,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和Western blot法分别检测肾组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平;电镜观察肾组织病理变化.结果:与模型组比较,左归降糖益肾方能降低DN小鼠空腹血糖及尿微量白蛋白含量(P＜0.01),并能调控miRNA-181a及GRP78的表达水平(P＜0.01);疗效等同于阳性药物组;并能改善肾组织病理损伤.结论:左归降糖益肾方可通过调控miRNA-181a、GRP78表达水平,从而抑制肾组织损伤.

目的 明确miRNA-181a在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)中的骨桥蛋白(OPN)的作用及相关机制.方法 分离培养出的VSMCs,使用100 nM AngⅡ处理后,检测不同时间点OPN蛋白表达水平的变化,同时利用qPCR检测miR-181a的变化后,将VSMCs分为空白对照组(不做任何处理)、AngⅡ刺激组(加入100 nM AngⅡ诱导)、阴性miRNA+AngⅡ刺激组(转入阴性miRNA并加入100 nM AngⅡ)以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组(转入miR-181a模拟剂并加入100 nM AngⅡ).48 h后Western blotting检测OPN在蛋白水平的变化,并使用Annex-inV/PI方式检测凋亡变化、transwell检测迁移的变化;随后VSMCs被分为CON与miR181a inhibitor组,48 h后使用Western blotting检测p53、Bax、p21变化.结果 使用100 nM AngⅡ处理后,VSMCs的OPN蛋白表达水平不断上升;使用100 nM AngⅡ处理24 h后,miRNA-181a相对表达量100 nM组显著低于0 nM组;VSMCs在转入miR-181a模拟剂48 h后,miR-181a模拟剂显著高CON组;在空白对照组、AngⅡ刺激组、阴性miRNA+AngⅡ刺激组以及miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组中,相对于阴性对照组,AngⅡ刺激组OPN表达显著上升,而miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组OPN表达显著低于AngⅡ刺激组,略高于阴性对照组;在细胞凋亡中,与AngⅡ刺激组阴性组和miRNA+AngⅡ刺激组相比,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组AnnexinV阳性细胞比率明显减少,说明能够明显抑制细胞凋亡.在细胞迁移中,miR-181a模拟剂+AngⅡ刺激组能够明显抑制细胞迁移.VSMCs在转入miR-181a inhibitor后,相对于CON组,p53、Bax、p21表达均有明显的上升.结论 miR181-a抑制了AngⅡ诱导VSMCs的OPN,同时抑制了AngⅡ诱导的凋亡与增殖,而miR181-a的抑制所诱导的凋亡与p53通路相关.

目的：探讨miRNA-223、 miRNA-181 a在急性白血病（ AL）中的表达情况及其在AL临床预后中的意义。方法采用实时定量逆转录PCR （RT-PCR）方法检测42例AL患者miRNA-223、 miRNA-181a的表达，其中急性髓细胞白血病（ AML）患者35例，急性淋巴细胞白血病（ ALL）患者7例，以同期住院的5例非白血病患者中miRNA-223、 miRNA-181a的表达作为参照物，采用单因素方差分析（ANOVA）中的LSD法对多组样本均数间的比较进行分析。结果采集的样本中符合标准的共39例（其中AML 29例， ALL 6例，正常对照组4例）；29例AML中miRNA-223、 miRNA-181a相对表达水平的均数分别为6.65±1.29、9.7±2.20，6例ALL中miRNA-223、 miRNA-181a相对表达水平的均数分别为4.76±0.76、10.06±2.47； miRNA-223在AML、 ALL中的表达水平均低于正常对照组（ P＜0.01）， miRNA-223在AML中的表达水平明显高于ALL （ P＜0.01）， miRNA-181 a在AML、 ALL中的表达水平均高于正常对照组（ P＜0.01）， miRNA-181a在AML、 ALL中的表达差异无统计学意义； miRNA-181a在预后好分组中的表达水平明显高于预后中等组，差异有统计学意义（ P＜0.05），与APL组差异无统计学意义；此外， miRNA-223、 miRNA-181 a在初治、复发组及不同年龄及性别间无明显差异。结论 miRNA-223、 miRNA-181 a的表达与AL关系密切相关，可作为AL诊断的新标准，尤其在AML、ALL鉴别诊断中具有重要意义； miRNA-181 a可能在AML预后中具有重要价值，与患者临床疗效和长期生存有着直接关系； miRNA-223、 miRNA-181 a的表达与年龄、性别、初治与复发无关。

目的 本研究旨在探讨miRNA-181a影响过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(HLE-B3)凋亡的能力.方法 通过构建基于慢病毒的RNAi质粒方法建立miR-181a模型,使用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)测定两个细胞凋亡相关基因(caspase-3和BAX)和三个潜在的miR-181a目标基因c-MET、环氧合酶-2(COX-2)、Snail家族锌指基因-2(Slug)的表达水平.通过酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定评估丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)水平.结果 证明了在转染pLKO.1-puro-miR-181 a慢病毒质粒后,HLE-B3细胞中的miR-181 a下调(P=0.0008).沉默miR-181 a能够逆转由H2O2诱导的细胞活性降低凋亡.此外,miR-181a下调也伴随着caspase-3和BAX的表达的下调以及COX-2和MDA表达降低(P=0.0089).结论 敲除miR-181a能够逆转由氧化应激诱导的HLE-B3细胞凋亡.这种保护性的潜在分子机制可能与caspase-3信号通路相关.

目的:探讨miRNA-181a对l-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl-pyridinium,MPP+)诱导的帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)多巴胺能神经元损伤的影响及其相关机制.方法:采用胎龄12.5 d的C57BL/6小鼠胚胎中脑进行多巴胺能神经元原代培养,依据不同处理方法分为4组:①空白对照(Control)组;②PD模型(MPP+)组;③阴性对照(miRNA-NC+MPP+)组;④miRNA-181a+MPP+组.酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxlase,TH)可以选择性标记多巴胺能神经元,因此采用荧光显微镜对各组TH染色阳性神经元数目、初级突触分枝及最长突触长度进行观察,分析各组之间的差异.结果:Control组多巴胺能神经元细胞体积较大,呈圆形或三角形,胞体发出1个、2个或多个长的分枝以及轴突发出的次级突起,胞体和轴突表面光滑,形态完整,神经元分枝之间相互交织呈网络,联系密切.miRNA-NC+MPP+组经Mpp+作用后多巴胺能神经元的数量减少,绝大多数表现为胞体存在,分枝数目及最长突触长度明显减少,网状交织稀少,表面不光滑,有的呈串珠样肿胀或轴突中断、丢失,仅存胞体,少数也表现为胞体空虚、丢失,仅存突起.miRNA-181a+MPP+组较miRNA-NC+MPP+组多巴胺能神经元数目有所增加,胞体形态较好,分枝数目与最长突触长度较miRNA-NC+MPP+组有所改善,且表面较光滑,神经元死亡程度较低.结论:miRNA-181a对Mpp+所致多巴胺能神经元损伤起到神经保护作用.

目的：探讨miRNA-181a对乳腺癌耐药蛋白( BCRP)及其介导的乳腺癌细胞耐药性的调控作用。方法应用生物信息学预测 BCRP mRNA-3ˊUTR 与 miR-181a 的结合位点；荧光素酶报告分析检测miR-181a与BCRP mRNA-3ˊUTR的结合作用；qRT-PCR和Western blot检测细胞中相关蛋白表达水平。结果与阴性转染组比较,miR-181a mimic 与PGL3-BCRP 3ˊUTR共转染后,荧光素酶活性明显降低( P<0.05)。 miR-181a mimic转染到MCF7/MX细胞48 h后,与阴性转染组相比,导致原本 miR-181a低表达的 MCF-7/MX细胞中miR-181a的表达增加(P<0.05),BCRP mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),而MRP、P-gp、LRP的mRNA和蛋白水平均无明显改变(P>0.05)；MCF-7细胞在miR-181a inhibitor转染48 h后,与阴性转染组相比,miR-181a的表达降低( P<0.05)。同时, BCRP mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05)。而MRP、P-gp、LRP的mRNA和蛋白水平无明显改变(P>0.05)。结论 miR-181a可通过靶向作用于BCRP mRNA-3ˊUTR区,调控BCRP表达。

目的:检测miRNA-181a在寒冷刺激诱导的妊娠高血压小鼠胎盘组织中的表达,研究下调miRNA-181a表达后对妊娠高血压小鼠血压的影响,并探讨初步机制.方法:尾静脉注射200 nmol/kgmiRNA-181 a-antagomir,2d后,通过反复寒冷应激刺激方法建立妊娠高血压小鼠模型.颈动脉插管法测量小鼠血压,qPCR检测胎盘组织中miRNA-181a的表达,使用NO试剂盒测量血清中NO含量,ELISA检测血清中血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)含量,Western印迹法检测胎盘组织中Akt,pAkt,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和peNOS蛋白表达.结果:与对照组相比,寒冷刺激诱导的妊娠高血压小鼠胎盘组织中miRNA-181a水平显著增加.与模型组相比,沉默miRNA-181a能够降低孕鼠的血压,升高血清NO和HO-1水平,并上调胎盘组织中pAkt和peNOS蛋白表达.结论:miRNA-181a表达可能与寒冷刺激诱导的妊娠高血压的发生发展有潜在关系.