目的:比较三种荧光定量PCR检测仪的偏倚.方法:采用实时荧光定量PCR,随机选择我院门诊和住院病人标本42例,用同一种试剂抽提DNA摸板后,分别在PE7000、伯乐及罗氏定量PCR扩增仪平行测定.结果42份样品在三种PCR检测仪上所测定HBVDNA拷贝/ml对数均值分别为5.625±1.449、5.420±1.960、5.803±1.536,三组之间比较无差异(P＞0.1).以测定拷贝数值≤或≥5.0×105/ml将其分为二组,在标本HBVDNA含量≤5.0×105拷贝/ml,伯乐测定值偏低,与罗氏比较差异有显著性意义((P＜0.05)).结论伯乐仪器对HBVDNA低拷贝含量标本检测值偏低,PE7000型仪器有操作简单、耗材低廉、检测数据稳定及价格适中等优点,更适合于临床.

目的 对ABI-7300荧光定量PCR仪和上海宏石SLAN96P荧光定量PCR仪进行比对和偏差分析.方法 在本院检验科ISO15189实验室认可中使用ABI7300和宏石SLAN96P荧光定量PCR仪同时检测20例涵盖整个仪器线性的HBV-DNA标本,以ABI-7300荧光定量PCR仪作为参比仪器,SLAN96P荧光定量PCR仪作为实验仪器,进行回归分析,计算偏倚％,评价其是否可接受.结果 ABI-7300荧光定量PCR仪与SLAN96P荧光定量PCR仪检测HBV-DNA的定量结果相对偏倚为6.9％,符合CNAS-CL36《医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明》明确要求即系统误差绝对值小于7.5％.结论 ABI-7300荧光定量PCR仪与SLAN96P荧光定量PCR仪检测的HBV-DNA结果具有可比性,可为临床提供可接受的检验结果.

荧光定量PCR技术已成为临床分子检测的重要手段之一,其以敏感性、特异性而被越来越多的科研人员所看好,荧光定量PCR仪的性能与检测结果的准确性密切相关.现将PCR仪选购过程中需注意的几点问题做一简单介绍.

目的:探讨荧光定量PCR分析仪边缘效应及实验误差的原因.方法:通过比较部分国外知名品牌荧光定量PCR仪的光路系统及加热模块设计原理,分析边缘效应及实验误差产生的原因.结果:传统荧光定量PCR仪光路设计缺陷和加热模块的孔间温度均一性不足会导致边缘效应和实验误差,是影响荧光定量PCR结果重复性的重要原因.结论:了解不同品牌荧光定量PCR仪的检测原理,选购性能优良的荧光定量PCR仪,尽量避免实验误差,以保证实验结果的准确性.

目的:探讨荧光定量PCR(FQ-PCR)用于男性不同标本的沙眼衣原体(Chlamydia tracgomatis,CT)检测情况.方法:用Gene Amp 5700型荧光定量PCR仪对3 440例尿道拭子、前列腺液、精液、尿液等4种标本进行CT检测.结果:共检出CT阳性者483例,占14.04%;其中尿道拭子阳性466例,占该类标本14.4%;前列腺液阳性9例,占该类标本14.5%;精液阳性5例,占该类标本4.7%;尿液阳性3例,占该类标本7.7%.PCR定量:1.08×103 Copy/ml～1.5×109 Copy/ml.结论:尿道拭子、前列腺液标本检出CT阳性率最高,其次为尿液、精液.

目的 对ABI-7300荧光定量PCR仪与DA-7600荧光定量PCR仪检测HBV-DNA的结果进行比对和偏差评估.方法 参照EP-9A2文件,分别在两台仪器上检测40例患者样本(浓度分布整个线性范围),获取HBV-DNA检测数据.以ABI-7300荧光定量PCR仪作为参比仪器,DA-7600荧光定量PCR仪作为实验仪器,建立回归方程,计算其绝对偏差与相对偏差.根据ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》中扩增检验项目分析性能标准,判断偏倚是否可接受.结果 ABI-7300荧光定量PCR仪与DA-7600荧光定量PCR仪检测HBV-DNA的定量结果相对偏倚为6.6％,符合ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》中扩增检验项目实验室内分析系统定期比对的标准(系统误差绝对值小于7.5％).结论 ABI-7300荧光定量PCR仪与DA-7600荧光定量PCR仪检测的HBV-DNA结果具有可比性,可为临床提供可接受的HBV-DNA检验结果.

介绍了荧光定量PCR仪(ABI7500)操作规程,总结了其日常维护和注意事项,为其使用提供指导.