目的: 运用二维电泳(2-DE)技术分离人类正常精子低丰度蛋白并建立全精子蛋白的2-DE整合图. 方法: 30例精子标本混匀后一次性进行蛋白提取,分别使用0.8、0.6、0.5、0.3 mg的蛋白上样量进行2-DE.运用MALDI-TOF法对确定2个恒定蛋白点的等位点(PI)和相对分子质量(Mr)作为图像的内参照点,对不同上样量的2-DE图进行比较分析,最后合成1张富集低丰度蛋白的整合图. 结果: 在0.5 mg图中分离出(1 080±23)个蛋白点,并合成具889个匹配点的整合图A.在上样量为0.8、0.6及0.3 mg的2-DE图中,分别新检测到381、50、32个在0.5 mg图中未检测到的蛋白点.最后合成具1 352个蛋白点的整合图B. 结论: 通过改变上样量的方法促进低丰度蛋白分离并合成具1 352个蛋白点富集低丰度蛋白的2-DE整合图.
