目的 探讨内质网应激(ERS)及其介导的细胞凋亡在锰引起的神经毒性中的作用,进一步探讨Sigma-1R在锰致神经系统损害中的作用.方法 以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为细胞模型,通过MTT比色法检测0.5、1、2、4、8和24 h处MnCl2对细胞存活的影响,流式细胞技术(FCM)检测上述时间段MnCl2对细胞凋亡的影响,Westernblot检测MnCl2作用上述时间后,细胞ERS分子伴侣GRP78、Sigma-1受体(Sigma-1R)、CHOP及凋亡相关蛋白Caspase-4表达的变化,Sigma-1R拮抗剂BD1047抑制其活性4和24 h后,检测细胞凋亡的情况.结果 MnCl2可呈时间、剂量依赖性地降低细胞存活率,并诱导SH-SY5Y细胞凋亡；MnCl2上调ERS分子伴侣GRP78、Sigma-1R、CHOP及Caspase-4的表达；加入拮抗剂BD1047后,在4和24 h细胞存活率明显下降.结论 MnCl2可诱导SH-SY5Y细胞发生ERS,ERS通过上调Sigma-1R的表达,增加细胞的存活率,这可能是预防锰神经毒性的机制之一.
目的:观察艾灸对慢性内脏痛敏模型大鼠L6-S1脊髓节段Fos蛋白和sigma-1受体(sigma-lR)表达的影响.方法:采用乳鼠结直肠扩张刺激建立慢性内脏痛敏大鼠模型,雄性SD新生大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组12只.采用腹部撤回反射(AWR)评分检测大鼠内脏痛敏;采用免疫组化的方法观察L6-S1脊髓节段Fos蛋白的表达;Western blot、实时荧光定量PCR检测脊髓节段sigma-1R蛋白及其mRNA的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠AWR评分升高(P＜0.01).艾灸干预后,艾炙组大鼠AWR评分下降(P＜0.01,P＜0.05).模型组Fos阳性表达高于正常组(P＜0.01),艾灸干预后,艾灸组Fos阳性表达降低(P＜0.01).模型组大鼠sigma-1R蛋白及其mRNA表达均高于正常组(P＜0.01),艾灸干预后,艾灸组sigma-1R蛋白及其mRNA表达均降低(P＜0.05).结论:艾灸有效缓解慢性内脏痛敏大鼠的痛敏状态,降低脊髓节段Fos蛋白、sigma-1R蛋白及其mRNA表达.
目的 探讨中药复方密蒙花方防护高糖下视网膜神经节细胞(RGC-5)的损伤机制.方法 将密蒙花方含药血清作用于高糖状态下的体外培养的RGC-5,采用CCK-8法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞凋亡.Real Time-PCR法及Western blot法检测RGC-5细胞内Sigma-1R mRNA,BDNFmRNA,CNTFmRNA和蛋白水平变化.结果 CCK-8法检测高糖状态下RGC-5细胞增殖受到抑制,而中药含药血清具有促进RGC-5细胞增殖的作用.高糖状态下,RGC-5细胞凋亡率增加,中药组与模型组比较,RGC-5凋亡率降低(P＜0.01).与正常组相比,高糖组BDNF、CNTF及Sigma-1R mRNA、蛋白水平降低,与高糖组相比,中药组BDNF、CNTF及Sigma-1R mRNA及蛋白水平升高.结论 密蒙花方含药血清可抑制高糖状态下体外培养的RGC-5细胞发生凋亡和损伤,其机制可能与调节神经营养因子BDNF、CNTF表达和Sigma-1R介导有关.
目的 探讨密蒙花方防治糖尿病视网膜病变大鼠早期视网膜神经细胞损伤的作用机制,为临床实践提供实验依据.方法 采用清洁级雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠120只,其中正常组30只,其余大鼠采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组及密蒙花方组,密蒙花方组采用密蒙花方灌胃3个月,模型组用与密蒙花方组等容的蒸馏水灌胃.给药1个月后,采用TUNEL法检测大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡情况;分别在给药1个月、2个月、3个月后采用高效液相色谱法检测各组大鼠视网膜中谷氨酸含量;PCR以及Western blot法检测视网膜中Sigma-1R mRNA和蛋白表达情况.结果 给药1个月后,TUNEL法检测结果示,密蒙花方组RGCs凋亡数少于模型组.高效液相色谱法检测结果示,给药1个月、2个月、3个月后,模型组较正常组谷氨酸含量均增加(均为P＜0.01),密蒙花方组谷氨酸含量较模型组均降低(均为P＜0.01).给药3个月后,正常组、模型组和密蒙花方组视网膜Sigma-1R mRNA相对表达量分别为1.71±0.11、0.67±0.09和1.50±0.14,Sigma-1R蛋白相对表达量分别为0.39±0.02、0.16±0.02和0.30±0.01;与正常组相比,模型组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均降低(均为P＜0.01);与模型组相比,密蒙花方组Sigma-1R mRNA及蛋白水平均升高(均为P＜0.01);密蒙花方组与正常组之间差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 糖尿病视网膜病变早期即出现视网膜神经细胞的凋亡及损伤,密蒙花方可通过谷氨酸和Sigma-1R介导机制干预糖尿病大鼠早期视网膜神经细胞损伤,从而起到阻止糖尿病视网膜病变进一步发展的作用.
