目的 观察DR5、DcR2在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞中的表达变化,探讨PCOS大鼠卵泡发育障碍的可能发生机制.方法 大鼠皮下注射硫酸普拉睾酮钠,以构建PCOS模型,分别用免疫组织化学法、RT?qPCR分析观察并比较DR5、DcR2在PCOS组和对照组大鼠卵巢颗粒细胞的表达情况.结果 免疫组织化学结果显示,在PCOS组大鼠卵巢各级卵泡颗粒细胞中,DR5的表达较对照组均显著增强(P<0.05),在PCOS组大鼠卵巢窦前卵泡和窦状卵泡颗粒细胞中,DcR2的表达较对照组同级别卵泡显著增强(P<0.05),在始基卵泡颗粒细胞的表达差异无显著性(P>0.05).RT?qPCR分析显示,DR5 mRNA和DcR2 mRNA在两组中都有表达,且二者在PCOS组大鼠卵巢颗粒细胞中的表达较正常对照组均明显增强(P<0.05).结论DR5和DcR2在颗粒细胞中的异常表达可能对PCOS大鼠卵泡的异常发育起到了一定作用,它们可能是通过参与颗粒细胞凋亡过程而对卵泡的发育造成了一定影响.
目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究.
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体(DR4、DR5、DcR1、DcR2)在乳腺癌组织的表达及意义.方法 用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测60例乳腺癌及对应的正常乳腺组织中TRAIL及其受体的表达.结果 乳腺癌组织中TRAIL、DcR1、DcR2表达均低于正常乳腺组织(P＜0.05),且TRAIL及其受体的表达与乳腺癌的分期、分级等无关(P＞0.05).结论 TRAIL及其受体在乳腺癌凋亡过程中起着重要的作用,TRAIL及其诱骗受体低表达同乳腺癌的发生关系密切.
目的 观察缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)大鼠肾损伤模型中肾组织及尿液诱骗受体2(decoy receptor 2,DcR2)的表达变化,探讨其与肾损伤的关系.方法 健康雄性SD大鼠40只,使用完全随机方法分为假手术组和I/R 60 min组,分别于术后1、3、7、21、35 d收集血、尿及双侧肾组织.检测各组大鼠血肌酐(serum creatinine,Scr)及尿NAG水平,使用PAS染色、Masson染色观察肾组织形态学变化并予以病理损伤评分,免疫组化检测肾组织DcR2表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿DcR2水平.结果 与假手术组Scr(21.3±1.6)μmol/L、尿NAG(4.4±0.6) U/mmol相比,I/R 60 min组1、3、7、21、35 d时Scr[(122.2 ±15.4)、(193.5 ±27.7)、(66.4±10.2)、(37.8±6.2)、(34.4±2.8)μmol/L]显著升高(P＜0.05),尿NAG[(9.8 ±2.0)、(17.0±2.5)、(7.8±1.5)、(6.5±2.1)、(6.7±2.3) U/mmol]显著升高(P＜0.05);病理结果显示皮髓交界区域出现明显的肾小管细胞坏死、脱落、基底膜裸露、细胞管型形成等病理表现,并于再灌注后期出现肾小管萎缩、间质纤维化等慢性化表现;I/R60 min组肾组织DcR2表达及尿DcR2水平较假手术组显著升高(P＜0.05),DcR2表达量及尿DcR2水平与肾功能、肾组织损伤程度呈正相关(P＜0.05);DcR2表达量与肾间质纤维化程度呈正相关(P＜0.05).结论 缺血再灌注大鼠肾组织DcR2表达量及尿DcR2水平与肾功能及肾组织损伤程度密切相关,DcR2可能在缺血再灌注后肾间质纤维化的进展中具有重要作用.
目的:观察正常人心脏组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的表达分布情况,为进一步明确这些分子在心肌损伤中的作用机制提供形态学依据.方法:用抗TRAIL及其受体的单克隆抗体(mAb),应用免疫组织化学染色技术,检测正常人心脏组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1和DcR2的表达.结果:TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1和DcR2在正常人心脏组织中均有表达,表达产物主要分布于胞浆内,胞膜上也有表达.结论:TRAIL及其受体可能参与某些病理状态下心肌细胞的凋亡过程.
目的:探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在直肠癌及癌旁组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化EliVision法检测37例直肠癌及其癌旁组织和10例正常直肠粘膜组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2表达水平.结果:TRAIL在正常直肠粘膜组织、癌旁及直肠癌组织中的表达呈递减趋势,而DR4、DR5的表达则与之相反(P＜0.05);TRAIL在中、低分化癌中的表达与高分化癌中的表达无差异,而DR4、DR5、DcR1、DcR2在中、低分化癌中的表达高于高分化癌中的表达(P＜0.05);TRAIL及其受体的表达与肿瘤的病理类型、患者的年龄、性别等因素无明显相关性(P＜0.05).结论:TRAIL在直肠癌中表达较正常直肠粘膜组织减弱,DcR1、DcR2在直肠癌中的表达高于DR4、DR5,提示TRAIL及其受体可能与直肠癌的发生、发展密切相关,为临床应用提供了一定的理论依据.
