目的观察HIV-1辅受体CCR5和CXCR4表型剔除对HIV-1 DP1株感染的阻断作用. 方法用含有pLNCX-R-K-S-K的重组逆转录病毒液感染原代人PBLs(外周血淋巴细胞),抗体-免疫磁珠法分离筛选转化成功PBLs,流式细胞仪检测筛选效率;HIV-1 DP1株攻击转化PBLs,进行合胞体形成和p24抗原分泌检测. 结果抗-NGFR/免疫磁珠法获得了转化成功的PBLs,流式细胞仪检测发现pLNCX-R-K-S-K转染组77.4%的PBLs NGFR(神经生长因子受体)标记物为阳性;HIV-1 DP1株攻击后,未转染组和pLNCX转染组可以见到明显的合胞体形成,而在pLNCX-R-K-S-K转化PBLs没有见到合胞体形成;pLNCX-R-K-S-K转染组在感染后第4、7和10天皆可发现显著的p24抗原分泌抑制,抑制率分别为15%、43%、19%. 结论细胞内趋化因子通过与CCR5和CXCR4细胞内结合,使HIV-1两类主要辅受体难以在PBLs表面表达,从而可以达到阻断HIV-1病毒感染的目的.

4/KDEL,RT-PCR鉴定表明经重组腺病毒转染的293细胞可有效转录SDF-1α/54/KDEL,证实其在293细胞中高效表达并产生6× 109PFU/mL的重组腺病毒;AdSDF-1α/54/KDEL处理的乳腺癌细胞,MOI在200以内无细胞毒性对细胞生长生长无影响,但能显著降低肿瘤细胞表面CXCR4的表达量.结论 本次构建的细胞内趋化因子突变体重组腺毒表达载体AdSDF-1α/54/KDEL的构建成功,并具有对乳腺癌细胞系MCF-7具有表型剔除作用.

目的 构建含趋化因子融合蛋白SDF-KDEL的慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,为研究Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增目的 基因片段SDF-KDEL,纯化后的PCR产物定向连接入pLenti6/V5-D-TOPO 载体,构建慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,并在293FT细胞中建立慢病毒株,最后转染人宫颈癌HeLa细胞观察SDF-1蛋白的表达.结果 成功构建了慢病毒载体pLenti6/V5-S-K,并证实SDF-1蛋白可在HeLa细胞系内表达.结论 慢病毒载体可介导CXC-细胞内趋化因子(CXC-in-trakine,SDF-K)基因高效、稳定转染HeLa细胞,可用于抗HIV-1感染的基因治疗.

目的:构建含cc细胞内趋化因子(CC-intrakine,KANTES-K)基因的慢病毒载体,为研究I型人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染的基因治疗奠定基础.方法:应用PCR技术,扩增目的基因片段RANTES-K,纯化后的PCR产物定向连接入pLenti6/V5-D-TOPO(R)载体,构建慢病毒载体pLenti6/V5-R-K,并在293FT细胞中建立慢病毒株,最后转染HeLa细胞观察RANTES蛋白的表达.结果:成功构建了慢病毒载体plenti6/V5-R-K,并证实RANTES蛋白可在人宫颈癌HeLa细胞系内表达.结论:慢病毒载体可介导CC-intrakine(RANTES-K)基因高效稳定转染HeLa细胞,可用于抗HIV-1感染的基因治疗.