本研究目的在于克隆小鼠 B 细胞淋巴瘤细胞膜免疫球蛋白(Ig)的单链可变区片段(scFv),与单核细胞趋化因子(MCP-3)的基因融合,构建融合基因scFv- MCP-3的表达载体,在大肠杆菌中表达融合蛋白,制备作为治疗B细胞淋巴瘤的独特型融合蛋白疫苗.采用RT-PCR法扩增BALB/c小鼠源B细胞淋巴瘤A20细胞株的Ig VH和Ig VL基因,重组PCR法用一段编码 (Gly4Ser)3连接肽的基因序列连接两基因,制备scFv片段.用相同PCR方法,选用一段编码NDAQAPKS连接肽的基因序列,连接scFv与MCP-3基因,获得scFv- MCP-3融合基因片段.定向克隆到原核表达质粒pGLo中,并在大肠杆菌中表达融合蛋白.测序结果表明:分别成功克隆A20细胞的Ig VH 和Ig VL基因,并成功制备了scFv片段和scFv- MCP-3融合基因片段;限制性酶切方法证实,重组pGLo/scFv- MCP-3原核表达质粒中融合基因准确插入.SDS-PAGE电泳分析显示,融合蛋白分子量约65 kD, 与预期蛋白分子量一致,并且目的蛋白占菌体蛋白的30%. 结论:本研究成功构建鼠源scFv片段与趋化因子MCP-3融合的独特型B细胞淋巴瘤疫苗表达质粒pGLo/scFv- MCP-3,并实现融合蛋白的初步表达.
目的:测定β型趋化因子单核细胞趋化蛋白-3(monocyte chemotactic protein-3,MCP-3)在慢性心力衰竭(心衰)患者中的表达改变,探讨其在慢性心衰发病中的作用.方法:收集25例慢性心衰患者(慢性心衰组)和10例正常人(正常对照组)外周血单个核细胞.用逆转录聚合酶链式反应检测MCP-3的表达,Bio-Rad图像分析系统进行相对定量后,分析MCP-3的表达改变及与外周血白细胞计数的关系.结果:慢性心衰组MCP-3表达阳性率及定量表达水平与正常对照组比较均有显著性差异(P＜0.05～0.01),原发病为扩张型心肌病、冠心病和原发性高血压的心衰患者MCP-3表达水平均显著高于正常对照组(P均＜0.01),且扩张型心肌病心衰患者的MCP-3表达水平显著高于冠心病和原发性高血压心衰患者,均有显著性差异(P均＜0.05);相关分析显示MCP-3表达水平与外周血白细胞和淋巴细胞计数不相关,但与中性粒细胞计数呈正相关(γ＝0.420,P＜0.05).结论:慢性心衰患者外周血趋化因子MCP-3表达上调,提示免疫因素可能参与了慢性心衰的发生发展.
荨麻疹是由于皮肤、黏膜小血管扩张及渗透性增加出现的一种局限性水肿反应.临床上特征性表现为大小不等的风团伴瘙痒,可伴有血管性水肿.慢性荨麻疹(chronic urticaria)是指风团每周至少发作2次,持续≥6周者[1].少数慢性荨麻疹患者也可表现为间歇性发作.因其发病率逐年升高且复发率高,临床治疗效果差,严重影响患者生活质量,使其近年来成为皮肤科研究的热点之一.
目的:明确单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)在喉鳞状细胞癌及癌旁正常组织的表达及分布,并探讨其在喉癌发病机制中的作用及临床意义.方法:采用RT-PCR,Western blot及免疫组织化学技术检测MCP-3在喉癌组织和癌旁正常组织中的表达和分布.结果:RT-PCR检测表明,MCP-3 mRNA在喉癌及喉正常组织内均有表达,MCP-3在喉癌组织中的表达较癌旁正常组织表达明显增多(P＜0.05),并且在喉癌组织Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期表达差异有统计学意义(P＜0.05);蛋白免疫印迹检测发现,喉癌组织和癌旁正常组织内均有MCP-3表达,MCP-3的表达位置在相对分子质量11 000;喉癌组织中MCP-3的表达明显较癌旁正常组织的表达增多(P＜0.01),并且在喉癌组织Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期表达之间差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组织化学染色发现:MCP-3阳性表达为黄色,主要分布在肿瘤细胞细胞质内,在喉正常的腺上皮组织中也可检测到阳性表达.结论:MCP-3可能与喉癌的发病机制有关,可能与肿瘤相关巨噬细胞的趋化和激活有关,肿瘤内的炎性微环境对肿瘤的发生、发展起重要作用.
背景与目的:趋化因子对于免疫细胞在肿瘤组织中的浸润起重要作用,转染趋化因子基因在许多类型的肿瘤中诱导了抗肿瘤免疫反应,本研究的目的是通过将趋化因子单核细胞趋化蛋白-3(monocytechemotacticprotein-3,MCP-3)基因转染小鼠大肠癌CMT93瘤细胞,探讨MCP-3用于诱导抗大肠癌主动免疫的可行性.方法:用脂质体将小鼠MCP-3基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测MCP-3的表达,趋化实验检测MCP-3的活性,体内实验观察野生型及MCP-3基因修饰瘤细胞的致瘤性,组织病理学检测肿瘤中免疫细胞的浸润及肿瘤的转移.结果:RT-PCR检测发现G418筛选得到的转染MCP-3的抗性克隆(CMT93/MCP3)表达MCP-3,而野生型CMT93不表达MCP-3.趋化实验显示CMT93/MCP-3的培养上清具有良好的趋化活性,趋化指数达5.57(P<0.05),对照组培养上清均无趋化活性.体内成瘤实验显示:与野生型瘤细胞相比,CMT93/MCP-3的成瘤率没有显著性下降,但源于CMT93/MCP-3的肿瘤生长速度与对照组相比显著减慢(P<0.05).在CMT93/MCP-3所形成肿瘤中有明显的免疫细胞浸润,对照组肿瘤中免疫细胞的浸润较少.接种CMT93/MCP-3瘤细胞的小鼠,肿瘤的转移受到了显著性的抑制,转移率为0%(0/5),与对照组CMT93(100%,4/4)和CMT93/mock(80%,4/5)相比均有显著性差异(P<0.05).结论:转染MCP-3基因能促进机体的抗大肠癌主动免疫反应,但单一MCP-3基因转染并不能彻底抑制肿瘤的生长.
