肠道干细胞分为两种，一个是表达Lgr5基底柱状干细胞，其表达与疾病分期有关，调控着细胞周期不断更替；另一个是＋4干细胞，与肿瘤异质性有关，表达Bmi1使细胞周期停滞，此外还包括Msi1。多项研究表明在结直肠癌中以上标志物是高表达的，并可作用于Notch和经典Wnt信号通路促进肿瘤的发生和进展。
目的 总结国内外对Musashi homolog 1(简称Msi1)与各种恶性肿瘤发生发展的关系及作用机制的研究现状.方法 应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,检索2010-06-2015-6文献,以“Msi1、MSI-1、Musashi-1和肿瘤”等为关键词,共检索到英文文献211条,中文文献180条.纳入标准:1)Msi1的研究进程;2)Msi1与肿瘤之间的关系;3)发表年限较近的文献.剔除标准:1)与肿瘤不相关;2)年代久远;3)重复性.根据上述标准纳入分析文献33篇.结果 Msi1是通过调节转录后的翻译过程来保持干细胞处于未分化的状态,通过调节Notch,Wnt/β-catenin信号通路直接或间接地影响干细胞细胞增殖和细胞命运的决定以及肿瘤形成的发展.Msi1基因在各种恶性肿瘤中高表达,其作用是参与影响肿瘤有关信号通路、细胞增殖及其凋亡等;降低Msi1基因的表达水平可有效诱导癌症细胞凋亡,阻止有丝分裂和细胞周期进程,抑制肿瘤细胞增殖并导致肿瘤消退.结论 Msi1通过对多种基因的转录后调控参与了肿瘤的发生发展和转移等过程,且与肿瘤的预后及治疗有关联.Msi1的研究将对临床肿瘤疾病基因层面的深入研究和诊断治疗提供新途径,有望成为肿瘤诊疗及靶向药物研究的新靶点,但仍需要进一步的研究证实.
目的 探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制.方法 设计合成特异性Msi1 siRNA序列,转染人结肠癌SW-480细胞；利用Western blotting检测Msi1和MMP-9蛋白的表达；细胞免疫化学检测MMP-9蛋白的表达；划痕实验观察Msi1 siRNA对细胞迁移能力的影响；Transwell实验观察其对细胞侵袭能力的影响.结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1蛋白的表达；并且使其迁移和侵袭能力明显下降,和对照组相比有统计学意义(P＜0.05),同时MMP-9在蛋白表达水平明显降低.结论 沉默Msi1基因后可以显著抑制人结肠癌SW-480细胞的迁移和侵袭能力,MMP-9基因表达下降可能参与这一过程.
目的 探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 针对Msi1基因mRNA序列设计合成siRNA,转染人宫颈癌Hela细胞;实验分Msi1 siRNA组、空白对照组、脂质体组及阴性对照组;通过RT-PCR法检测Msi1基因在mRNA水平的表达;分别利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色试验、群体倍增时间及平皿克隆实验分析干扰Msi1基因对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制效应;通过细胞划痕实验观察干扰Msi1对细胞迁移能力的影响;利用Transwell小室实验观察干扰Msi1对细胞侵袭能力的影响.结果 Msi1,siRNA能有效抑制人宫颈癌Hela细胞中Msi1基因的表达;Msi1 siRNA转染Hela细胞24、48、72h后,与其他各组比较,Msi1 siRNA组Hela细胞的生长、增殖速度明显减缓(均P＜0.05).空白对照组Hela细胞群体倍增时间为(20.18±0.01)h,而干扰Msi1基因处理后的Hela细胞,群体倍增时间延长至(35.68±0.04)h(P＜0.05);同时平皿克隆实验结果发现,Msi1 siRNA处理后的Hela细胞与其他各组相比,Hela细胞生长明显减慢(均P＜0.05);细胞划痕实验和Transwell小室实验分别显示处理后的Hela细胞其迁移和侵袭能力均明显下降,与其他各组相比差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 沉默Msi1基因表达对人宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭有负性调节作用.
目的 探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人结肠癌SW-480细胞增殖的影响.方法 针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SW-480细胞;采用RT-PCR法检测Msi1基因表达;MTT比色实验、群体倍增时间及平皿克隆形成实验分析Msi1 siRNA对人结肠癌SW-480细胞的生长抑制效应,流式细胞术检测Msi1 siRNA 对其细胞周期的影响.结果 Msi1 siRNA能有效抑制人结肠癌SW-480细胞中Msi1基因的表达;Msi1 siRNA转染SW-480细胞24、48、72 h后,与其它各组比较,其吸光度值明显降低,Msi1 siRNA 组SW-480细胞生长、增殖速度明显减缓(P<0.05);空白对照组的SW-480细胞群体倍增时间为22.15 h,而Msi1 siRNA处理后的细胞,群体倍增时间延长至37.76 h(P<0.05);平皿克隆形成实验结果发现,Msi1 siRNA处理后的细胞与其它各组相比,细胞生长明显减慢.流式细胞术表明Msi1 siRNA可导致SW-480细胞G0/G1期阻滞,S期细胞减少.结论 沉默Msi1基因对人结肠癌SW-480细胞增殖有负性调节作用.
目的 构建针对MSI1基因的小分子RNA干扰慢病毒表达载体,检测其在人脑胶质瘤U-87MG细胞中的表达效率及对细胞生物学行为的影响.方法 构建针对MSI1短发卡RNA(shRNA)的慢病毒载体pGCL-绿色荧光蛋白(GFP)-MSI1,用293T工具细胞包装后,转染人脑胶质瘤U-87MG细胞,实验分为3组:(1)空白组;(2)阴性对照组;(3)pGCL-GFP-MSI组.荧光显微镜下检测转染72 h后pGCL-GFP-MSI1的转染效率;Western blot检测U-87MG细胞内MSI1蛋白和肿瘤干细胞标记蛋白HES1的表达;噻唑蓝(MTT)法检测pGCL-GFP-MSI1转染后U-87MG细胞1～7 d的增殖活性;平板克隆形成实验检测U-87 MG细胞的克隆形成能力;Transwell实验检测U-87MG细胞体外侵袭能力;流式细胞仪(FCM)检测pGCL-GFP-MSI1转染后对U-87MG细胞凋亡的影响.结果 成功构建pGCL-GFP-MSI1慢病毒载体,并成功转染U-87MG细胞,荧光显微镜显示转染效率达80％以上;Western blot结果显示pGCL-GFP-MSI1抑制U-87MG细胞中MSI1蛋白(31.64％)和HES1蛋白(37.25％)的表达(P＜0.01);MTT结果显示转染pGCL-GFP-MSI1后第3天起U-87MG细胞的增殖活性明显下降(P＜0.01);平板克隆形成实验结果显示转染pGCL-GFP-MSI1后U-87MG细胞的克隆形成数明显下降(27.24±2.52,P＜0.0l);Transwell实验结果显示pGCL-GFP-MSI1转染后U-87MG细胞的侵袭细胞数明显下降(18.24 ±3.52,P＜0.01);FCM结果表明pGCL-GFP-MSI1转染后明显提高U-87MG细胞的凋亡率(22.81％,P＜0.01).结论 MSIl-小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体能特异性下调人脑胶质瘤U-87MG细胞中MSI1的表达,通过降低肿瘤干细胞信号通路中相关因子的活性来抑制人脑胶质瘤U-87MG细胞的增殖活性及侵袭能力,并促进细胞的凋亡.
目的 探讨RNA干扰沉默MSI1表达对人脑胶质瘤细胞化疗药物敏感度的影响.方法 构建针对MSI1 mRNA的小分子RNA干扰(siRNA)重组质粒pSIREN-MSI1,转染人脑胶质瘤U-87MG细胞;Western blot检测U-87MG细胞内MSI1蛋白的表达;CCK-8法观察U-87MG细胞对化疗药物替莫唑胺(TMZ)敏感度的改变;流式细胞仪(FCM)检测pSIREN-MSI1转染后对U-87MG细胞凋亡的影响.结果 成功构建了重组质粒pSIREN-MSI1,并成功转染U-87MG细胞;Western blot结果显示pSIREN-MSI1抑制U-87MG细胞中MSI1蛋白的表达(P＜0.01);CCK-8结果显示在替莫唑胺作用下,pSIREN-MSI1组U-87MG细胞的存活率明显下降(P＜0.01);FCM结果表明pSIREN-MSI1转染后明显提高U-87MG细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 MSI1 siRNA能特异性抑制人脑胶质瘤细胞U-87MG细胞中MSI1的表达,增强人脑胶质瘤U-87MG细胞对化疗药物的敏感度,并促进细胞的凋亡.
目的 探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移的影响.方法 针对Msi1 mRNA 序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.RT-PCR法检测 Msi1基因表达;Western blot检测survivin、caspase3及MMP-9表达;MTT法检测SGC-7901细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 Msi1 siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中Msi1的表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P<0.05);survivin、MMP9蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNA组凋亡率增高.结论 沉默Msi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移有负性调节作用.
