目的 探讨多位点串联重复序列分析方法(multiple-locus variable-number tandem repeat analysis,MLVA)在嗜麦芽窄食单胞菌分型中的应用.方法 选用文献报道的12个嗜麦芽窄食单胞菌串联重复序列位点及引物,采用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,根据凝胶电泳图谱计算出各位点的串联重复单元拷贝数,通过BioNumerics(Version 4.0,Applied Maths BVBA,Belium)聚类分析.结果 设置12个位点串联重复单元拷贝数100％的相似性为判断标准,可将106株嗜麦芽窄食单胞菌分为34个MLVA基因型,流行病学上有关联的菌株具有相同的基因型.设置12个位点串联重复单元拷贝数45％相似性为判断标准,将106株菌株分为11个群,相同的地域、分离来源和分离部位的菌株具有相关性.结论 串联重复序列位点分型技术具有简便、快速、特异、可比性、可重复性和高鉴别力等优点,适合嗜麦芽窄食单胞菌的分子流行病学研究.

目的 对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的遗传基因刑别进行不同分子分型方法的对比研究,从分子流行病学角度分析黑龙江省EHEC的检出情况,并对多位点串联重复序列分析(MLVA)分型方法用于 EHEC 的分型效果进行评价.方法 采用毒力基因鉴定、核酸脉冲场凝胶电泳(PFGE)与MLVA 3种方法对70株EHEC进行遗传基因型别分析.结果 70株菌中有12株含有eaeA基因,7株含有hlyA基因,1株含stx1与 stx2,2株含有stx2基因.在PFGE的研究中,依据经XbaⅠ酶切后,具有相同电泳图谱的菌株被定义为PFGE同一群落的菌株,将47株菌株分成35个型别.MLVA通过对7个位点的串联重复序列的比较研究,发现10株O157菌株在7个位点上等位基因的数目为2～5种,10株细菌被分为8个MLVA的型别.结论 在农户养殖中存在EHEC的水平传播,MLVA的6个分型位点对EHEC O157菌株都有部分菌株不存在等位基因,还需增加菌株数量以对其分型位点做进一步研究.

目的 分析河北省鼠疫疫源地分离的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)基因型别和遗传变异特征.方法 采取水煮法对康保县1972-2017年分离的鼠疫菌提取DNA,利用已有文献报道的多位点可变数目串联重复序列(MLVA)和差异区段(DFR)两种分型方法,经过PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳和序列分析后确定被测菌株的基因型别.结果 河北省分离的鼠疫菌MLVA基因分型一致,并确定了串联重复序列位点的重复数目;DFR基因型为G17和G20.G17型主要缺失DFR1、6、7、13、15、16、17、18,G20型主要缺失DFR1、6、7、12、13、15、16、17、18.结论 河北省鼠疫疫源地分离的鼠疫菌株遗传特征比较稳定,2017年动物间疫情是邻近地区的疫情蔓延还是当地菌株的遗传变异,需要进一步研究.

[目的]初步探讨结核分枝杆菌散在分布重复单位(Mycobacterial interspersed repetitive units)和多位点串联重复序列(variable number of tandem repeats)技术基因分型技术在河南省结核病分枝杆菌基因分型中的应用,初步了解河甫省局部地区MIRU-VNTR基因型种类及其分布.[方法]2007年在河南省的嵩县、新密、扶沟、中牟4个县及南阳市的结核病防治机构实验室分离培养的317株结核分枝杆菌,设计引物,应用PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对结核分枝杆菌进行分型检测分析,基因分型聚类分析采用Bio-Numerics软件.[结果]对317株结核分枝杆菌临床分离株的12个MIRU位点检测结果显示明显的基因多态性.经基因聚类分析,可分5个基因群(Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群和Ⅴ群),292个基因型.其中Ⅰ群占4.7%,含15个基因型;Ⅱ群占67.8%,含198个基因型;Ⅲ群占22.7%,含64个基因型;Ⅳ群1.8%,含4个基因型;Ⅴ群3.5%,含11个基因型.[结论]初步表明河南省结核分枝杆菌MIRUs 基因存在明显的多态性,至少存在5个MIRU型,主要流行型为Ⅱ型.