目的 方法诱导HepG2细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞.对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测.实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照.结果 经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功.HepCHLine3在形态学上与HGPRT-HepG2细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG2和人原代肝细胞的基因数.传代培养的HepCHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg.对照组的HepG2和人原代肝细胞相应结果为阴性.提示该细胞携带并分泌HBV DNA.结论 该杂交细胞兼具HepG2细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础.
