目的研究视神经钳夹伤后凋亡相关基因Bcl-2和Bax在大鼠视网膜上的表达,探讨Bcl-2和Bax在视神经钳夹伤后视网膜神经元凋亡中的作用.方法将雄性Long Evans大鼠50只,随机分成实验组和对照组,每组25只大鼠.建立大鼠视神经钳夹伤模型,实验组和对照组按视神经夹伤后不同时间分为伤后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d 5个时间点,每个时间点5只动物.处死动物后取材,制备大鼠视网膜石蜡切片,进行免疫组化SABC染色,以检测视网膜Bcl-2和Bax的表达.结果视神经钳夹伤后视网膜Bcl-2的表达下降,而Bax表达仍为不变的水平.结论视神经钳夹伤后视网膜Bcl-2表达的下降,导致了视网膜神经元的凋亡.

目的 探讨大鼠视神经钳夹伤致视网膜细胞凋亡过程中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量和依达拉奉对视网膜细胞的保护作用.方法 选择健康清洁级SD大鼠192只(384眼),雌雄各半,随机分为正常组、假手术组、对照组、治疗组,每组各48只.对照组、治疗组用视神经钳夹法制作大鼠视神经夹挫伤模型；治疗组造模后腹腔注射依达拉奉30 mg·kg-1,用生理盐水稀释后每隔12 h腹腔注射给药.给药时间为30 min,共14 d.分别于造模后3d、6d、10 d、14 d处死大鼠.光镜下观察各组不同时间点视网膜结构,通过激光共聚焦显微镜观察视网膜切片TUNEL荧光标记,2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯为标记探针,通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞内2',7'-二氯双氢荧光素的荧光强度.以AnnexinV/PI双染色法通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞凋亡率.结果 造模后3～14 d,正常组及假手术组视网膜细胞偶见TUNEL阳性标记；对照组见大量TUNEL阳性标记细胞,但治疗组明显少于对照组.视网膜细胞中ROS的表达量在造模后3d、6d、10 d、14 d时正常组分别为32.530±2.203、43.600±3.635、32.800±1.952、45.330±2.902,治疗组分别为84.507±3.754、65.130±5.308、63.400±5.226、66.990±6.320,对照组分别为92.830±2.875、99.900±0.100、99.300±1.212、92.470±2.159,每个时间点治疗组和对照组比较、正常组和对照组比较、正常组和治疗组比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05)；假手术组与正常组间相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05).细胞总凋亡率也明显升高,造模后3d、6d、10 d、14 d时正常组分别为(9.550±0.325)％、(10.380±0.642)％、(11.540±1.224)％、(10.520±0.839)％,治疗组分别为(22.960±2.574)％、(27.590±1.369)％、(33.950±4.580)％、(25.810±2.170)％,对照组分别为(35.510±3.086)％、(37.550±2.357)％、(40.220±5.011)％、(34.320±3.351)％,每个时间点治疗组和对照组、正常组和对照组、正常组和治疗组之间比较,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),假手术组与正常组间相比差异均无统计学意义(均为P＞0.05).结论 依达拉奉通过清除ROS,抑制了视网膜细胞凋亡,具有一定的视网膜细胞保护作用.

目的 观察视神经钳夹伤大鼠晶状体损伤对视网膜节细胞存活和轴突再生的影响.方法 将32只sD大鼠随机分为正常组(8只)、对照组(8只)和处理组(16只).正常组不作任何处理;对照组行单纯双眼视神经钳夹伤;处理组行视神经钳夹伤,同时双眼玻璃体注射5 μL生理盐水,依据注射方式的不同分为晶状体损伤组和晶状体未损伤组.7 d后荧光金逆行标记视网膜神经节细胞,14 d后行视网膜铺片和节细胞计数,并用免疫组织化学法检测视网膜生长相关蛋白(growth associated pro-tein-43,GAP-43)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达.结果正常组和对照组的视网膜节细胞计数分别为(1 987±154)mm-2和(908±123)mm-2,晶状体损伤组和晶状体未损伤组分别为(1 206±134)mm-2和(800±112)mm-2.晶状体损伤组存活的节细胞数与对照组和晶状体未损伤组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05).免疫组织化学法检测显示晶状体损伤组视网膜GAP-43和GFAP的表达亦比对照组和晶状体未损伤组强.结论 晶状体损伤能促进视神经钳夹伤大鼠视网膜神经节细胞的存活,并增强视网膜GAP-43和GFAP的表达,促进轴突的再生.

背景 研究证实绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)全身应用可到达视神经及视网膜组织,对视网膜缺血-再灌注和视神经钳夹伤后视网膜神经节细胞(RGCs)具有保护作用,但EGCG对视神经损伤后RGCs上位神经元的影响目前尚未见报道.目的 探讨EGCG对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体(LGN)神经元的保护作用.方法 48只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术+EGCG组、视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组,每组12只.用40g微型视神经夹于大鼠右眼球后约2mm处夹持视神经60s建立视神经钳夹伤模型,假手术+EGCG组、视神经钳夹+EGCG组大鼠于造模前2d始每日腹腔内注射EGCG(25mg/kg)共5d,后改为口服(2mg/kg),视神经钳夹+生理盐水组大鼠以同样的方法注射生理盐水.于造模4周后处死大鼠并取脑组织,用Nissl染色法计数外侧膝状体背侧核(dLGN)神经元数目,用免疫组织化学染色法和Western blot法观察神经丝蛋白(NF-L)在LGN的表达,比较各组大鼠dLGN中神经型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组织化学染色阳性细胞数量.结果 视神经钳夹伤后4周,假手术+EGCG组左侧、右侧dLGN神经元数量与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0.906、P=0.561);视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组钳夹同侧dLGN神经元数量与正常对照组相比,差异无统计学意义(P=0.794、P=0.646),对侧dLGN神经元数量均低于正常对照组(P=0.000、P=0.015),而视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧dLGN神经元数量高于视神经钳夹+生理盐水组(P=0.007);NF-L检测可见视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧LGN的NF-L表达量高于视神经钳夹+生理盐水组(P=0.002);dLGN的nNOS阳性细胞计数在正常对照组、假手术+EGCG组、视神经钳夹+EGCG组之间差异无统计学意义(P>0.05),而视神经钳夹+生理盐水组钳夹对侧dLGN的nNOS阳性细胞高于视神经钳夹+EGCG组(P=0.000).结论 EGCG对大鼠视神经钳夹伤后LGN的神经元可能具有一定的保护作用,这种保护作用可能与EGCG抑制了nNOS的表达有关.

目的:研究大鼠视神经夹伤后视网膜节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR).方法:成年雄性SD大鼠28只经视神经夹伤后,在4,8,12,24,72,168h,通过免疫荧光组织化学染色法观察RGC中非折叠蛋白相关因子(PERK,IRE-1,calnexin)、AMPA受体亚基GluR2的表达;采用Fluoro-Jade C法染色显示RGC凋亡状况,并与正常对照组比较.结果:大鼠视神经夹伤后,与正常对照组相比,RGC表达PERK,calnexin明显增强.从损伤后4h,阳性RGC细胞数增加,至24h时达到峰值,PERK,calnexin阳性细胞数分别为15.00±0.36和11.75±1.44个,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05).从损伤后8h,RGC的IRE-1及GluR2表达增强,其中GluR2在胞膜上表达明显增强;Fluoro-Jade C染色在72h时RGC出现表达,并与GluR2的表达双标.结论:大鼠视神经夹伤后,与UPR相关的PERK,IRE-1,calnexin在RGC表达明显增强,提示UPR可能参与了RGC的凋亡.

目的 探讨大鼠视神经钳夹伤致视网膜细胞凋亡过程中活性氧(reactive oxygen speciesin,ROS)的含量和依达拉奉(edaravone,MCI-186)对视网膜细胞的保护作用.方法 SD大鼠192只,雌雄各半,随机分为正常组、假手术组、对照组、治疗组,每组各48只.对照组、治疗组用视神经钳夹法制作大鼠视神经夹挫伤模型;治疗组造模后腹腔注射依达拉奉30mg/kg,用生理盐水稀释后每隔12h腹腔注射给药.给药时间为30min,共14d.于实验的3、6、10、14d处死大鼠.2',7'-二氯双氢荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)为标记探针,通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞内2',7'-二氯双氢荧光素(DCF)的荧光强度;以AnnexinV/PI双染色法通过流式细胞术定量检测各组不同时间点视网膜细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡的形态特征;透射电镜观察各组鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的超微结构改变.结果 造模后3～14d,视网膜细胞中活性氧的表达量和细胞总凋亡率在3、6、10、14d时每个时间点对照组较治疗组和正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),假手术与正常组间相比均无显著性差异.透射电镜检查显示:治疗组大鼠RGCs细胞核、染色质、细胞器损伤较对照组有明显减轻.结论 依达拉奉通过清除ROS,阻止了RGCs凋亡,具有一定的视网膜细胞保护作用.