目的克隆小鼠白细胞介素-18(mIL-18)全长cDNA,并使其在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR和巢式-PCR,从活化小鼠腹腔巨噬细胞中扩增成熟IL-18的全长cDNA.经双酶切,将该cDNA片断插入表达载体pRSET-C,构建含T7启动子的原核表达载体pRSET-mIL-18.测序鉴定后,将重组体转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG和/或乳糖的诱导下,使重组质粒获得表达.结果重组质粒读码框及mIL-18的序列与预期一致,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析获得证实.结论已成功构建了原核表达载体pRSET-mIL-18,并使其在大肠杆菌中获得了融合表达.

目的克隆小鼠白细胞介素-18 cDNA(mIL-18 cDNA),构建mIL-18 cDNA逆转录病毒载体.方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从昆明小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到测序载体pBluscript中,测序后,再亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中.结果RT-PCR扩增出约840 bp片段,经酶切鉴定显示mIL-18 cDNA逆转录病毒载体(mIL-18pLNCX)构建成功.结论昆明小鼠mIL-18 cDNA与已发表的其他种小鼠的序列相同,mIL-18 cDNA可能无种间差异.我们已成功地把mIL-18 cDNA克隆到逆转录病毒载体pLNCX中.

目的研究小鼠白细胞介素-18(mIL-18)对H22肝癌的作用.方法以1×105和1×106 H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型.在接种H22细胞后的1、4、8天,每天用10μg mIL-18腹腔注射荷瘤小鼠,连续注射5天;或者在接种后1天,分别用5μg 、10μg 和20μg 不同剂量的mIL-18腹腔注射小鼠.mIL-18作用后存活的小鼠,再次腹腔注射1×105 H22肝癌细胞.结果构建得到小鼠H22肝癌腹水瘤模型,在接种1× 105 H22肝癌细胞后1、4天注射mIL-18的小鼠比对照组小鼠的存活率显著升高(P＜0.05),存活小鼠能抵抗再次接种的H22肝癌细胞的攻击.结论mIL-18对小鼠H22肝癌具有显著抑制作用,mIL-18作用后存活的小鼠具有对H22肝癌细胞的免疫记忆性.